麻芥平喘巴布剂对哮喘的药效及其免疫学调节机制研究

发布时间：2017-12-10 21:08

本文关键词：麻芥平喘巴布剂对哮喘的药效及其免疫学调节机制研究

【摘要】：支气管哮喘(下文简称为“哮喘”)作为一种免疫的变态反应性疾病,引起这种疾病的因素有很多种,以气道的炎症性反应、气道的高反应性和气道的可逆性的阻塞作为它的主要特征。哮喘在世界范围内严重危害着人类健康,世界卫生组织将其列为疾病当中的“四大顽症”之一。中医学有着千百年的发展历史,在这个过程中,对于哮喘这一疾病的诊断和治疗,中医学是有着非常丰富的经验的,中医学治疗哮喘有治疗方式多样化,且无明显的毒副作用等特点,并由于其疗法的天然性和疗效的显著性等优点,使中医学在治疗哮喘的实践中,逐步得到了广大哮喘患者的接受和认可。中医学治疗哮喘有内治法和外治法等多种方式,并且外治法治疗哮喘有其独特的优点,使其在哮喘的治疗中占有重要地位。麻芥平喘巴布剂是由麻黄、白芥子、延胡索、苦杏仁和生姜汁制成的一种新型的中药外用制剂,针对哮喘兼有气郁、痰阻、血瘀的特点而组方,以期在哮喘的发作期可缓解气道痉挛,在缓解期对于其发作能够有一定的预防作用。本课题主要从麻芥平喘巴布剂对BN大鼠哮喘动物模型的药效学评价及其对Th1/Th2、 Th17/Treg失衡调节机制的研究,来进一步分析在哮喘的治疗中其发挥的具体作用,以及它是如何对哮喘的免疫学发病机制进行调节的。希望为日后将其开发成质量可控,疗效明确,机制清晰的新型中药制剂奠定基础。[目的]1.制备并观察BN大鼠哮喘动物模型,通过比较麻芥平喘巴布剂与阳性药物干预后治疗效果的异同,以验证麻芥平喘巴布剂的疗效。2.通过进一步研究给药后不同组别的Th1、Th2、Th17及Treg相关细胞因子水平及相关蛋白表达水平的情况,探究麻芥平喘巴布剂的免疫学调节机制。[方法]40只SPF级雄性BN大鼠,适应性喂养三天,随机分为四组：空白对照组、模型对照组、阳性对照组、麻芥平喘巴布剂治疗组。实验第四天,模型对照组、阳性对照组、麻芥平喘巴布剂治疗组三组,第一次腹腔注射10%的致敏OVA混悬液。实验第十一天,以上三组第二次腹腔注射10%的致敏OVA混悬液。实验第十六天起,阳性对照组腹腔注射1%地塞米松注射液(注射剂量为0.001m1/g)；麻芥平喘巴布剂治疗组在背部膈俞和肺俞贴敷麻芥平喘巴布剂。实验第十九天起,实验动物用1%OVA溶液雾化激发,连续激发七天。给药激发结束后,四组BN大鼠在麻醉状态下检测肺功能指标(气道阻力为主),而后取支气管肺泡灌洗液(BALF)、全血、脾脏和肺组织标本。分别用于全血和BALF中白细胞(WBC)分类计数,Th1、Th2、Th17和Treg相关细胞因子的Elisa检测,流式细胞分类计数,HE染色和免疫组化检测。[结果]1.肺功能检测结果：麻芥平喘巴布剂治疗组在乙酰甲胆碱(Ach)浓度为3.125mg/ml和6.25mg/ml时,气道阻力值显著低于模型组(P0.01),在Ach浓度为12.5mg/ml时,气道阻力值低于模型组(P0.05)。空白对照组,麻芥平喘巴布剂治疗组和阳性对照组动物在Ach浓度分别为3.125mg/ml,6.25mg/ml和12.5mg/ml时,气道阻力值均无显著差异。2.全血中WBC分类计数结果：麻芥平喘巴布剂治疗组的嗜酸性粒细胞(EOS)的数目和中性粒细胞的数目均显著低于模型组(P0.01),嗜酸性粒细胞的数目,在空白对照组、麻芥平喘巴布剂治疗组、和阳性对照组三组之间无显著性差异；中性粒细胞的数目在空白对照组与麻芥平喘巴布剂治疗组之间无显著性差异。3. BALF中WBC分类计数结果：麻芥平喘巴布剂治疗组的嗜酸性粒细胞(EOS)的数目和中性粒细胞的数目均显著低于模型组(P0.01),嗜酸性粒细胞的数目,在空白对照组、麻芥平喘巴布剂治疗组、和阳性对照组三组之间无显著性差异；中性粒细胞的数目在空白对照组与麻芥平喘巴布剂治疗组之间无显著性差异。4.肺组织切片HE染色结果：模型对照组可见肺组织病理切片中有明显的炎症细胞浸润,支气管黏膜上皮可见细胞排列紊乱,甚至细胞脱落,还可见肺泡间隔增厚等明显的病理损伤。麻芥平喘巴布剂治疗组与阳性对照组可见肺组织病理切片中有少量的炎症细胞浸润,未见其它肺组织的明显病理损伤。空白对照组肺组织病理切片中未见炎症细胞的浸润,且肺泡和支气管黏膜上皮的结构均完整清晰。5.脾脏流式细胞计数结果：麻芥平喘巴布剂治疗组Thl细胞数目高于模型组(P0.05),Th2细胞的数目是显著低于模型组的(P0.01),Th17细胞的数目是低于模型组的(P0.05), Treg细胞的数目是显著高于模型组的(P0.01)。与空白对照组和阳性对照组相比,Th1、Th2、Th17和Treg细胞数目均无显著差异。6.免疫组化结果：麻芥平喘巴布剂治疗组肺组织IFN-γ积分光密度值显著高于模型组(P0.01),IL-4积分光密度值低于模型组(P0.05),IL-17积分光密度值显著低于模型组(P0.01),IL-10积分光密度值与模型组未见显著差异,T-bet积分光密度值高于模型组(P0.05), GATA-3积分光密度值显著低于模型组(P0.01), RORγt的积分光密度值是显著低于模型组的(P0.01), FoxP3的积分光密度值是高于模型组的(P0.05)。麻芥平喘巴布剂治疗组与空白对照组、阳性对照组相比,IFN-γ、IL-4、IL-17、GATA-3、RORγt和FoxP3积分光密度值均无显著差异,麻芥平喘巴布剂治疗组与阳性对照组的T-bet和IL-10积分光密度值显著高于空白对照组(P0.01)。7.血清、BALF及肺匀浆中Th1、Th2、Th17及Treg相关细胞因子Elisa检测结果：麻芥平喘巴布剂治疗组血清中IL-4浓度低于模型组(P0.05),BALF和肺匀浆中IL-4浓度均显著低于模型对照组(P0.01)；血清中IFN- γ浓度高于模型对照组(P0.05),BALF和肺匀浆中IFN- γ浓度均显著高于模型组(P0.01)；血清、BALF和肺匀浆中IL-17浓度均显著低于模型组(P0.01)；血清中IL-10浓度显著高于模型对照组(P0.01),BALF中IL-10浓度高于模型组(P0.05),肺匀浆IL-10浓度与空白对照组相比没有显著差异,与模型对照组相比也没有显著差异。麻芥平喘巴布剂治疗组在与空白对照组、阳性对照组两组进行比较时,发现血清、BALF和肺匀浆中IL-4浓度无显著差异；血清中IFN- γ浓度高于空白对照组(P0.05),与阳性对照组相比无显著差异,BALF中IFN- γ的浓度是显著高于空白对照组的(P0.01),与阳性对照组相比,IFN- γ的浓度未见显著差异,肺匀浆中IFN- γ浓度与空白对照组和阳性对照组相比无显著差异；血清、BALF和肺匀浆中IL-4浓度无显著差异；血清中IL-10浓度是显著高于空白对照组的(P0.01),与阳性对照组相比,IL-10的浓度未见显著性的差异,BALF和肺匀浆中IL-10浓度均无显著差异。[结论]1.麻芥平喘巴布剂对BN大鼠哮喘动物模型有治疗作用。肺功能检测结果表明麻芥平喘巴布剂对于Ach引起的气道平滑肌痉挛有很好的拮抗作用；WBC分类计数可见其能显著降低EOS及中性粒细胞等多种炎症细胞的数目；HE染色表明其能减少哮喘动物的肺组织病理损伤。2.麻芥平喘巴布剂对BN大鼠哮喘的免疫调节是通过改善Th1/Th2、Th17/Treg失衡而实现的。脾脏流式细胞分类计数、肺组织免疫组化检测及血清、BALF和肺匀浆相关细胞因子的Elisa检测结果均表明,麻芥平喘巴布剂治疗组Th2、Th17低表达和Th1、Treg高表达,而模型组Th2、Th17高表达和Th1、Treg低表达,可见麻芥平喘巴布剂可以通过改善Th1/Th2失衡和Th17/Treg失衡进而对哮喘动物进行免疫调节。可见,麻芥平喘巴布剂对BN大鼠哮喘动物模型有较好的治疗作用,并通过改善Th1/Th2、Th17/Treg失衡而对哮喘模型进行免疫调节,其对哮喘的治疗作用及其他调节机制有待于临床进一步证实。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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