大鼠妊娠与分娩期盆底肌中Desmin及Dystrophin的表达及意义

发布时间：2018-01-18 09:36

  本文关键词：大鼠妊娠与分娩期盆底肌中Desmin及Dystrophin的表达及意义　出处：《河北医科大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：目的: 1研究大鼠妊娠与分娩对肛提肌中结蛋白（Desmin）与抗肌营养不良蛋白（Dystrophin）的分布及其基因表达量的影响。 2研究大鼠妊娠与分娩对盆底肌细胞骨架的影响。 3探讨妊娠与分娩在盆底功能障碍性疾病（pelvic floor dysfunction, PFD）发病机制中的作用。 方法: 1研究对象由河北医科大学实验动物中心提供雌性成年未生产过的Wistar大鼠45只，体重180～220g。雄性成年Wistar大鼠10只，体重220～250g。其中随机选取15只雌性成年未生产过的Wistar大鼠为对照组，其余30只雌性成年未生产过的Wistar大鼠使其受孕并分娩，分为阴道分娩组，产后6天组。 2取材将各组大鼠在麻醉状态下，，暴露肛提肌，迅速取肛提肌组织约100mg。分为两块，生理盐水洗净，用滤纸吸干，一块置于冻存管，立即置-80℃低温冻存，用于实时荧光定量PCR测定；另1块置入体积分数为4%多聚甲醛溶液中固定24h，常规脱水、石蜡包埋备用。 3采用HE染色及免疫组织化学方法观察各组肛提肌形态的变化及Desmin和Dystrophin分布变化。 4采用实时荧光定量PCR检测各组肛提肌中Desmin和Dystrophin基因表达量的变化。结果资料采用均数±标准差（±S）表示，采用SPSS16.0统计软件进行统计学处理，以P＜0.05认为差异有统计学意义。 结果： 1HE染色结果：HE染色镜下观察各组肛提肌切片，其中对照组肛提肌组织均由彼此紧密相连的肌纤维构成，为均染的粉红色，每个肌纤维周边有多个细胞核，紧靠肌膜内表面，肌束间含有胶原纤维、成纤维细胞，血管及神经等结构，肌纤维无变性坏死表现；而阴道分娩组肛提肌肌纤维较对照组肥大，排列相对稀疏，略微紊乱，可见少部分肌细胞横截面积大小不一、有萎缩和肥大细胞，局部可见到肌纤维核中心移位、存在散在坏死肌纤维等；产后6天组肛提肌肌纤维排列较紧密，肌纤维无变性坏死表现。 2免疫组化染色结果：免疫组化Desmin阳性反应位于肌纤维胞浆内，而Dystrophin阳性反应则位于肌纤维胞膜。阴道分娩组Desmin的表达与非妊娠组和产后6天组相比明显减少，差异具有统计学意义（P＜0.05），而Desmin的表达在非妊娠组和产后6天组之间无显著差异；阴道分娩组Dystrophin的表达较非妊娠组和产后6天组减少，差异具有统计学意义（P＜0.05），非妊娠组和产后6天组之间无显著差异。3荧光实时定量PCR结果：阴道分娩组Desmin mRNA表达量较非妊娠组、产后6天组明显降低，差异均有统计学意义，P＜0.05，产后6天组Desmin mRNA表达量与非妊娠组差异无统计学意义；阴道分娩组Dystrophin mRNA表达量较非妊娠组、产后6天组下降，差异均有统计学意义，P＜0.05，而非妊娠组与产后6天组差异无统计学意义。 结论： 1在大鼠妊娠分娩期盆底肌纤维形态发生改变，并引起Desmin、Dystrophin表达减少，在产后盆底肌纤维发生再生，Desmin、Dystrophin合成增加。 2盆底肌细胞骨架改变是对妊娠与分娩的适应性反应。 3妊娠与分娩在盆底功能障碍性疾病（pelvic floor dysfunction, PFD）的发病机制中有一定的作用。妊娠与分娩期大鼠盆底肌中Desmin和dystrophin减少可能是盆底功能障碍性疾病的发病因素。
[Abstract]:Objective:
1 the effects of pregnancy and childbirth on the distribution of Desmin and Dystrophin in the muscle of the anal levator and the expression of gene expression in the muscle of the anal levator were studied.
2 the effects of pregnancy and childbirth on the cytoskeleton of pelvic floor muscle in rats were studied.
3 to investigate the role of pregnancy and childbirth in the pathogenesis of pelvic floor dysfunction (PFD).
Method:
1 research objects provided by the experimental animal center of Hebei Medical University female adult nulliparous 45 Wistar rats, weighing 180 ~ 220g. adult male Wistar 10 rats, Wistar rats weighing 220 ~ 250g. were randomly selected 15 adult nulliparous females as control group, Wistar rats had not produced the remaining 30 the adult female pregnancy and childbirth, divided into the vaginal delivery group, postpartum 6 days group.
2 were the rats under anesthesia, exposed levator ani muscle, quickly take levator muscle tissue about 100mg. is divided into two pieces, saline wash, dry with filter paper, a block on the freezing tube, at -80 deg.c for cryopreservation, real-time fluorescence quantitative PCR assay; the other 1 implants the integral number of 4% poly fixed 24h, Formaldehyde Solution in the conventional dehydration, paraffin embedded sections.
3 HE staining and immunohistochemical method were used to observe the changes of the morphology of the levator anus and the changes of the distribution of Desmin and Dystrophin.
4, real-time fluorescence quantitative PCR was used to detect the changes of Desmin and Dystrophin gene expression in each levator ani muscle. Results the data were expressed by mean + standard deviation (+ S), and SPSS16.0 statistics software was used for statistical analysis. The difference was statistically significant in P < 0.05.
Result锛

本文编号：1440374