糖尿病大鼠结膜囊菌群变化及中药干预对结膜血管及组织的影响

发布时间：2018-03-01 21:28

本文关键词： 杯状细胞菌群糖尿病结膜病变血管炎性因子　出处：《北京中医药大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一部分糖尿病大鼠结膜囊菌群变化近年来糖尿病引起的眼表病变在广泛受到人们关注。结膜作为一个暴露器官,与皮肤直接相连,细菌从出生不久就存在其中。结膜囊的正常菌群泛指共生于结膜囊,且可保持动态平衡的多种需氧和厌氧菌群。这些菌群总是随着个人、环境因素的变化而变化,一旦这种平衡被破坏,正常细菌就可导致眼部感染。[目的]1. 观察DM大鼠结膜囊菌群变化2. 观察DM大鼠微环境改变及易感性变化[研究方法]SPF级六周龄SD大鼠13只,雄性,体重240g-300g,饲养于中日友医院临床研究所SPF级中心动物实验室,实验前经裂隙灯显微镜及眼底检查,排除大鼠双眼异常情况。随机分为模型组7只,正常对照组6只。模型组经腹腔一次性注射1％STZ:60mg/kg,诱发实验性大鼠糖尿病模型,72小时后尾尖静脉连续3天血糖≥16.7mmol/L者即为糖尿病大鼠模型。实验周期6个月,取结膜囊细菌进行培养、分离、鉴定。RT-PCR法检测结膜炎性因子表达水平。采用SPSS20.0统计软件对数据进行分析处理,以P≤0.05作为差异具有统计学意义。[研究结果]对糖尿病大鼠结膜囊菌群进行分离培养,从细菌种类来看,正常对照组和实验组,结膜囊的菌群均以革兰氏染色阳性细菌为主,共有的为屎肠球菌和大肠杆菌,其他细菌均不同。分离到的共有的菌实验组比正常对照组多。正常对照组的肠球菌的种类和数量比实验组明显减少,在实验组中出现了多种肠球菌,还出现了克氏考克菌和普通变形杆菌。从细菌数量来看,大鼠患糖尿病后,细菌增多。[结论]DM大鼠结膜囊菌群数量增多,种类改变,提示大鼠结膜囊微环境发生变化且导致其易感性增加。第二部分益气活血通络方干预对糖尿病大鼠结膜血管与组织的影响眼表(0cular surface)其解剖学上指起始于上睑或下睑缘间的整个眼球表面所有粘膜上皮,它包括了角膜上皮与结膜上皮,结膜上皮涵盖了：球结膜、睑结膜和穹窿部结膜。眼表上皮来源于各个的干细胞,结膜上皮由复层扁平细胞为主,夹有许多分泌黏蛋白的杯状细胞。眼表疾病泛指对角膜、结膜等眼表正常结构与功能造成损害的疾病。糖尿病是一种内分泌系统疾病,它以高血糖为特征,由代谢紊乱造成涉及全身各个组织的多种并发症。糖尿病可引起视网膜病变、白内障、屈光不正、角膜病变等多种眼部改变。[目的]探讨糖尿病对结膜囊菌群的影响[研究方法]SPF级六周龄SD大鼠25只,雄性,体重240g-300g,饲养于中日友医院临床研究所SPF级中心动物实验室,实验前经裂隙灯显微镜及眼底检查,排除大鼠双眼异常情况。除正常对照组6只外,其余经腹腔一次性注射1%STZ:60mg/kg,诱发实验性大鼠糖尿病模型。72小时后尾尖静脉连续3天血糖≥16.7mmol/L者即为糖尿病大鼠模型。糖尿病大鼠随机分为糖尿病模型组7只,治疗组6只,阳性对照组6只。治疗组和对照组大鼠在造模成功后次日开始给药,每日上午10时给药一次,给药途径为灌胃。治疗组(炙黄芪、红参、桂枝、三七粉、丹参、地龙、茯苓等药水煎,浓度为1g/ml)给药量为10g/(kg·d)；阳性对照组(羟苯磺酸钙胶囊)大鼠给药量为250mg/(kg-d)。每2周定期检测大鼠血糖、体重变化,实验周期为9个月。取材前,行激光多普勒血流检查球结膜上部血管流速。用10%水合氯醛腹腔注射,过量麻醉处死大鼠,制备球结膜及穹窿部组织切片,通过光镜、电镜检查观察并拍照。免疫组织化学染色检测MMP9、AGES. IL-6、IL-12p40、TNFa在结膜组织的表达变化。使用图像分析软件,对免疫组化的显色强度进行测量并进行定量分析。采用SPSS20.0统计软件对数据进行分析处理,以P≤0.05作为差异具有统计学意义。[研究结果](1)模型建立后,模型组大鼠各时期体重比正常对照组明显减轻(P0.05)差异有统计学意义；(2)基于连续监测血糖结果：模型组大鼠血糖均高于正常对照组,P0.05,差异有统计学意义；(3)形态学观察：正常对照组大鼠结膜各层组织层次清楚,上皮细胞形态完整,排列整齐,杯状细胞在上皮细胞基底层丰富分布。模型组：上皮细胞排列紊乱,炎细胞明显增多,结膜杯状细胞减少明显,主要分布在上皮基底层。阳性对照组：上皮细胞排列紊乱,炎细胞增多,结膜杯状细胞明显减少,分布在上皮基底层。治疗组：上皮细胞排列较整齐,结膜杯状细胞较丰富且分布于上皮基底层。(4)激光多普勒血流图：模型组较正常对照组血流速度减慢(P=0.004,P0.05),治疗组与正常对照组无明显差异(P=0929,P0.05),模型组较治疗组血流减慢(P=0.019,P0.05). (5)MMP9在DM大鼠结膜的表达：模型组MMP9表达明显高于正常对照组、治疗组、阳性对照组。AGES在大鼠结膜表达：模型组AGES表达明显高于正常对照组、治疗组、阳性对照组。(6)电镜：模型组结膜血管周细胞消失,血管内皮细胞结构不完整。[结论]在糖尿病大鼠模型成功的基础上,观察到糖尿病大鼠结膜血管单位面积血流速度增加,且血管及组织出现病理性改变,结膜血管表现在内皮细胞破坏,周细胞消失,结膜组织杯状细胞减少,同时对结膜组织MMP9、AGES进行免疫组化观察到表达明显升高。益气活血通络方能明显改善糖尿病大鼠结膜单位面积血流速度,可使内皮细胞结构完整,周细胞破坏减小,益气活血通络方用于糖尿病大鼠可以延缓糖尿病结膜病变发生和发展。
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【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5

【参考文献】