比格犬胃黏膜防御—修复机制老化的初步研究

发布时间：2018-03-08 15:49

本文选题：胃黏膜防御-修复机制　切入点：胃窦黏膜　出处：《复旦大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：胃黏膜防御-修复机制包括黏液-碳酸氢盐-磷脂屏障、胃黏膜上皮细胞及上皮细胞间的紧密连接和黏膜下血流三层屏障,健全完整的GMD-RM是维持正常胃黏膜功能的必要条件。临床工作中发现老年人上消化道溃疡、糜烂等炎症性疾病发病率高,且病情较中青年人重。因人体标本采集较为困难,不可控因素多,无法控制实验中的混杂因素,而大鼠胃黏膜的增龄变化已有研究较多,因此本课题选取健康成年比格犬为研究对象,通过观察不同年龄组正常胃窦黏膜、幽门腺体及上皮细胞组织学、超微结构及与GMD-RM相关生物活性因子的增龄变化,以探讨胃黏膜防御-修复功能有无随增龄减退的现象,并对其机制做初步探讨。方法：选取健康成年比格犬19只,按照年龄分为三组：1.5-6岁为中青年组共8只,6-9岁为低龄老年组共5只,≥9岁为高龄老年组共6只。静脉麻醉处死前称体重,抽血做血常规、生化全套；处死后十分钟内离体取胃窦黏膜组织3块,1块做常规病理,1块做电镜检查,另1块即刻冻存做分子生物学检测。光镜下观察胃窦黏膜组织学形态、有无肠上皮化生及异型增生等,半定量分析黏膜炎症指数,同时测量固有膜厚度、测定黏液腺体实质百分比；电镜下观察上皮细胞及幽门腺细胞超微结构,对比细胞间连接变化,计算黏原颗粒实质百分比；分子生物学检测包括TBA法测定胃窦黏膜组织中MDA、MPO、LPO含量,硝酸还原酶法测定胃窦黏膜组织中NO含量,Elisa法测定胃窦黏膜组织中Survivin、 PTEN、CGRP、VEGF、紧密连接蛋白ZO-1、COX-1、COX-2、Caspase-3、Caspase-9及端粒酶的含量。结果：(1)19只比格犬体重均在14-20Kg范围内；血常规、生化指标均正常。(2)光镜下观察各年龄组比格犬胃窦黏膜,显示：随增龄上皮细胞形态、黏液腺腺体形态及细胞形态未见明显变化,所有标本中均未见肠化及异型增生部分标本有少量炎性细胞浸润,半定量测定各组炎症指数,结果表明无明显统计学差异(P=0.977)。在高龄老年组可见胃窦黏膜固有层间质明显增生,黏液腺腺体排列较中青年组稀疏。定量测定发现固有膜厚度、胃窦黏液腺实质比例随增龄有下降趋势,且有统计学差异(P=0.015,P=0.002)。(3)电镜下观察各年龄组上皮细胞及胃窦幽门腺细胞超微结构以及细胞间的连接,显示：上皮细胞间的紧密连接无明显变化,但中间连接及缝隙连接随增龄有逐渐疏松趋势；幽门腺细胞中分与泌黏液功能相关的细胞器一黏原颗粒,分布随增龄逐渐稀疏。定量测定示黏原颗粒面积分数比随龄有明显降低,且有统计学差异(P=0.000)。(4)TBA法定量测定比格犬胃窦黏膜组织中MDA、LPO、MPO含量,发现随增龄MDA、MPO含量有升高趋势,但无统计学差异(P值分别为0.452,0.094),两组间比较发现高龄老年组胃窦黏膜组织中MPO含量均值高于中青年组,且有统计学差异(P=0.044); LPO含量随增龄升高,且有统计学差异(P=0.047)。 (5)硝酸还原酶法定量测定胃窦黏膜组织中NO含量,胃窦黏膜组织中NO含量随增龄有降低趋势,但无统计学差异(P=0.200)。(6) Elisa法定量测定胃窦黏膜组织中Survivin。PTEN、CGRP、VEGF、紧密连接蛋白ZO-1、COX-1、COX-2、 Caspase-3、 Caspase-9及端粒酶的含量。随增龄,胃窦黏膜组织中Survivin含量明显降低(P=0.049),PTEN、caspase-9的含量明显升高(P值分别为0.015,0.002)；而CGRP、VEGF、ZO-1、COX-1、COX-2、caspase-3、端粒酶的含量随增龄虽有降低趋势,但无统计学差异。两组间比较发现,低龄老年组胃窦黏膜组织中VEGF、COX-1、COX-2的含量明显低于中青年组,(P值分别为0.024,0.033和0.048)；高龄老年组和中青年组比较,高龄老年组胃窦黏膜组织中caspase-3的含量均明显低于中青年组(P=0.026)。结论：比格犬胃窦黏膜厚度、幽门腺体密度、上皮细胞间中间连接及缝隙连接紧密程度、分泌黏液的黏原颗粒百分比均随增龄明显降低,提示胃窦黏膜及其功能腺体在形态学上存在随增龄老化现象。同时发现：随增龄,胃窦黏膜组织中与脂质过氧化及氧化应激损伤程度相关的MDA、LPO、MPO含量有增加趋势,与黏膜下血流调节相关的CGRP、NO含量降低,与抗细胞凋亡相关的Survivin有降低趋势,而诱导细胞凋亡的PTEN、caspase-3、caspase-9含量有升高趋势,与胃黏膜血管再生能力相关的VEGF含量有降低趋势,间接调节胃黏膜血流的COX-1、COX-2有降低趋势。由此可以推测：胃窦黏膜防御-修复机制的老化是多种因素相互作用的结果。
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【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R573

【共引文献】