环孢素A对肾盂灌注下大兔积水肾的保护作用研究

发布时间：2018-03-11 19:42

本文选题：肾盂积水　切入点：环孢素A　出处：《武汉大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究背景：随着电子技术的发展,各种医疗设备的更新更加趋向于电子化、精细化,现在腔镜手术已逐渐成为外科手术的常规治疗方法,成为大多数医生和患者的更加倾向的治疗手段,尤其在泌尿外科领域,随着泌尿系结石发病率的增高,结石的处理方式更加微创化,伴随着医疗设备的进步,各种输尿管镜、肾镜及输尿管软镜等已经广泛应用于结石的处理,因其切口小、住院时间短、碎石效果好、术后恢复快等特点基本取代了传统的开放手术,成为大多数医生和患者首选的治疗的方式,但是,由于腔镜手术空间的局限性,整个手术过程只能在泌尿系腔道内进行,所以在一定程度上增加了腔道内的压力,尤其是在术前因结石引起的肾脏积水固有的肾脏病理性损伤,更加加重了肾脏的损伤,当肾盂内压力超过一定界限时导致肾脏缺血性损伤,从而导致急性肾衰竭。当肾脏发生缺血性损伤时,最先出现功能障碍的是肾小管细胞,在肾小管细胞病理生理过程中,肾小管细胞的线粒体通透性转换孔的开放是关键环节,其并发的线粒体介导的细胞凋亡是造成肾小管细胞损伤的重要因素,环孢素A是特异性的MPTP抑制剂代表,目前在许多肾脏和肾外器官动物实验和一部分小规模临床研究中已经证实其可以通过抑制线粒体膜通透性转换孔(mPTP)而减少脏器的缺血性损伤,本课题拟先建立不同程度肾积水模型,在肾盂灌注之前先药物干预治疗,观察环孢素A对积水肾肾盂灌注时的保护作用。目的：建立不同程度的肾脏积水模型,通过药物的靶向干预治疗,探讨环孢素A (CsA)对不同程度积水肾在受到外界肾盂压力灌注时的保护作用,观察线粒体靶向干预治疗后,积水肾在受到外界肾盂灌注后肾小管细胞线粒体形态及功能改变情况。方法：(1)取成年新西兰大白兔24只,雌雄不拘,随机分为3组,分别为对照组(n=6)、轻度肾积水组(n=9)和重度肾积水组(n=9)。经耳静脉麻醉后取腹部正中切口,暴露左侧输尿管上段,并游离输尿管上段及腰大肌,对照组仅暴露输尿管后立即关闭切口,将实验组的左侧输尿管上段1/4和2/3分别埋入腰大肌裂隙内,制作成输尿管轻度和重度梗阻模型,然后3-0肠线逐层关闭腹腔。隔日行双肾B超探查,观察肾脏积水及输尿管扩张情况,2周后用B超探头探查左侧肾脏及输尿管积水扩张情况；石蜡切片标本HE染色观察肾小管损伤情况；电子显微镜下观察肾脏超微结构改变。(2)购买成年新西兰大白兔48只,雌雄不拘,分为两组,每组24只分别建立轻度(M)和重度(S)肾积水模型,每组再随机分为4个亚组,两组中各取12只分别行CsA灌胃,1周后M组分别行60和100mmHg灌注,S组分别行20和60mmHg灌注,灌注后48h取肾行肾脏损伤评定,苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织变化,免疫组化学测NGAL表达,Wstern-blot检测细胞色素C和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(caspase)-3表达。(3)取第二部分实验获得部分肾脏标本,提取线粒体,行透射电镜检测,观察线粒体形态改变情况；通过线粒体膜电位检测试剂盒行线粒体膜电位检测,观察线粒体膜电位变化情况。结果：(1)造模结束2周后,B超探查左肾结果发现：对照组(N)肾盂分离为0.07±0.03cm,,M组肾盂分离为0.89±0.32cm,S组肾盂分离为1.72±0.35cm,三者之间两两比较p0.05,差异性具有统计学意义；肉眼下可见两组肾脏均不同程度的肿大,肾盂扩张积水,HE染色后光镜下观察评分结果显示：N组、M组与S组评分分别为N(1.8±0.4)；M(23.1±4.3)；S(37.5±3.8),三者比较结果具有差异性,差异具有统计学意义(P0.05)；电镜下可见肾小管上皮细胞的线粒体肿胀,部分空泡样改变,对照组未见明显线粒体肿胀,M组和S组比较,线粒体肿胀比例较低。(2)药物干预组HE评分分别为M1’(12.8±3.3)；M2'(13.1±4.4)；S1’(18.8±3.6)；S2’(21.1±1.9),分别与对照组M1(24.2±5.5);M2(36.5±4.9); S1(39.2±4.8); S2(56.2±4.1)相比差异有统计学意义(p0.05)；药物干预组CytC表达分别为M1'(0.44±0.02);M2'(0.45±0.01);S1'(0.71±0.01);S2'(0.73±0.01),分别与对照组M1(0.59±0.01);M2(0.78±0.02);S1(0.83±0.01);S2(0.88±0.01)相比差异有统计学意义(p0.05); caspase3表达分别为M1'(0.43±0.01);M2'(0.49±0.01);S1'(0.74±0.02); S2'(0.75±0.01),分别与对照组M1(0.71±0.02);M2(0.85±0.02); S1(0.87±0.01); S2(0.98±0.01)相比差异有统计学意义(p0.05)；药物干预组NGAL表达分别为M1'(2.67±0.51);M2'(3.17±0.41);S1'(3.33±0.52);S2'(3.50±0.55),分别与对照组M1(4.51±0.55);M2(5.50±0.54);S1(5.67±0.81);S2(6.66±0.51)相比差异有统计学意义(p0.05)。(3)肾脏超微结构改变结果：电镜下可见肾小管上皮细胞的线粒体肿胀,部分空泡样改变,线粒体嵴消失；与模型组比较,相应的药物干预组肾脏超微结构改变明显减轻,线粒体肿胀比例减少；MMP检测结果发现：药物干预组MMP分别为M1'(1.71±0.31);M2'(1.54±0.26);S1'(1.66±0.17);S2'(1.53±0.15),对照组M1(1.42±0.22);M2(0.88±0.25);S1(1.39±0.18);S2(0.81±0.18),药物干预组与对照组比较,结果具有差异性,具有统计学意义(P0.05),药物干预组内比较,M1’与M2’比较,S1’与S2’比较均无明显差异(P0.05)。结论：(1)腰大肌包埋法可准确有效的建立轻度和重度肾积水模型,约一周后开始出现肾积水。(2)CsA可降低线粒体内凋亡因子的释放,抑制凋亡的级联反应,抑制肾小管细胞凋亡,对不同程度积水肾在肾盂灌注时具有保护作用。(3)CsA对维护线粒体的通透性和完整性具有保护作用,能维持线粒体膜电位的稳定性,抑制细胞凋亡的发生,减少肾小管的上皮细胞的损伤。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692.2

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