丹参对铁超载小鼠肾脏损伤的保护作用及机制研究

发布时间：2018-03-18 09:37

本文选题：铁超载　切入点：丹参　出处：《河北医科大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:铁对新陈代谢和生物活动具有很重要的意义。然而，过多的铁会沉积在肝脏、心脏、肾脏等组织中，造成组织器官氧化损伤。目前治疗铁超载的方法主要是使用螯合剂，但是存在着一些缺点，比如，肝功能障碍，过敏反应，粒细胞缺乏症，患者依从性较差等。因此，研究开发治疗铁超载疾病的新药品是十分有意义的。丹参具有抗脂质过氧化作用和清除羟基自由基的能力。因此，我们推测，丹参可能对铁超载致肾脏损伤具有保护作用。本研究的目的是探讨丹参注射液对铁超载致肾毒性的保护作用及可能的作用机制。方法:将75只小鼠随机分为5组，分别为空白对照组、铁超载模型组、去铁胺阳性药物对照组、丹参注射液低剂量治疗组和丹参注射液高剂量治疗组，每组15只。其中，丹参注射液低剂量组和丹参注射液高剂量组小鼠分别腹腔注射丹参注射液3g/kg/d和6g/kg/d，去铁胺阳性药物对照组小鼠腹腔注射去铁胺100mg/kg/d，空白对照组和铁超载模型对照组分别注射等量的生理盐水。然后，在腹腔注射给药4小时后，铁超载模型组、去铁胺阳性药物对照组、丹参注射液低剂量组和丹参注射液高剂量组小鼠均腹腔注射右旋糖酐铁50mg/kg/d，空白对照组小鼠注射等量的生理盐水。在第14天于末次给药后，称量小鼠的体重，然后用戊巴比妥钠麻醉。取血，分离血清，以便于用试剂盒检测血清中肌酐（CR）和尿素氮（BUN）等水平。迅速分离小鼠肾脏组织，并用冰预冷的生理盐水洗涤，取部分组织迅速放入液氮中冷冻，采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡；用火焰原子吸收光谱法分析肾脏匀浆中的铁浓度；采用试剂盒测定肾组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）的活性以及丙二醛（MDA）的含量。剩下的肾脏组织浸泡在4%多聚甲醛中，一部分组织做普鲁士蓝染色，用来观察组织中铁的沉积情况。剩下部分组织分别作苏木素和伊红（HE）染色、PAS染色、Massson染色，用于病理形态学的检测。采用高效液相色谱法测定丹参注射液主要成分。结果： 1丹参注射液的主要成分分析结果显示，丹参注射液中含有的丹参素，原儿茶醛和丹参酚酸B的浓度分别是2.15、0.44和1.01mg/mL。 2丹参注射液对小鼠体重的影响与空白对照组小鼠相比，铁超载模型组的小鼠体重增加明显降低（P0.01）。然而，丹参注射液低剂量组、丹参注射液高剂量组和去铁胺阳性对照组小鼠的体重结果说明铁超载小鼠给予丹参和去铁胺治疗后，体重增加量则明显高于铁超载模型组（分别是P 0.01，P 0.01，P 0.05）。 3丹参注射液对肾脏中铁普鲁士蓝染色结果的影响与正常肾脏组织相比较，在铁超载模型小鼠的肾小球中存在着大量的沉积铁。然而给予丹参和去铁胺治疗后，肾小球中铁的沉积量则明显下降。 4丹参注射液对小鼠病理形态学的影响空白对照组小鼠的肾脏组织没有明显的形态学改变。然而相比之下，铁超载模型小鼠的肾脏则出现了显著的组织学改变。损伤情况评估分数也直接显示出铁超载模型组的肾小球损伤和肾小管间质损伤接近于正常肾脏组织的21倍，，两者之间呈现显著性差异（P 0.01）。当给予铁超载小鼠低剂量和高剂量丹参注射液治疗后，肾小球损伤和肾小管间质损伤程度降低40%-50%，有显著性差异（P 0.01）。 5丹参注射液对小鼠肾脏组织中铁沉积的影响铁超载模型组的小鼠的肾脏组织中存在着大量的沉积铁。但是，在给予丹参治疗后，小鼠肾脏中铁的含量明显下降（P 0.01）。 6丹参注射液对小鼠血清中BUN和CR的影响与空白对照组相比，铁超载模型组小鼠的血清BUN和CR水平呈现明显升高的现象（P 0.01）。但是，与铁超载模型组小鼠相比较，在所有丹参注射液低剂量组和丹参注射液高剂量治疗组的小鼠的血清BUN和CR水平已经表现出明显的降低趋势，并且有显著性差异（P 0.01）。 7丹参注射液对小鼠肾脏组织中SOD、GSH-Px、MDA的影响与空白对照组相比，铁超载模型组的肾脏组织中SOD和GSH Px的活性明显降低（P 0.01）。但是与铁超载模型小鼠肾脏组织相比，去铁胺组和丹参治疗组的小鼠肾脏中，这两种酶的活性的下降趋势明显减小（P0.01）。此外，铁超载模型组小鼠的肾脏组织中的MDA的浓度比空白对照组明显增高（P 0.01）。可是，给予丹参治疗后，MDA浓度明显低于铁超载模型组（P 0.01）。 8丹参注射液对小鼠肾脏细胞凋亡的影响空白对照组肾管状细胞凋亡程度维持在一个较低水平。相比之下，铁超载模型组的肾脏组织中肾管状细胞凋亡明显增多，TUNEL阳性数量也明显增多（P 0.01）。给予丹参注射液治疗后，TUNEL阳性的肾管状细胞数量显著减少（P 0.01）。结论：我们的研究结果表明丹参注射液能够抑制铁超载引发的肾脏损伤。丹参的这些对抗铁超载损伤的作用机制很可能与抑制铁的沉积、抑制脂质过氧化、减少细胞凋亡等有关。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R285.5

【参考文献】