六味地黄丸对900MHz电磁辐射致大鼠睾丸损伤的影响

发布时间：2018-03-22 10:35

  本文选题：六味地黄丸　切入点：电磁辐射　出处：《河北医科大学》2017年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的:以900MHz手机频率电磁辐射为实验条件,以大鼠睾丸组织为研究对象,以睾丸组织形态学、超微结构、氧化抗氧化、Nrf2蛋白表达、DNA损伤修复蛋白γH2AX表达为主要观测指标,选择常用补肾中药六味地黄丸为干预因素,观察900MHz手机频率电磁辐射对雄性大鼠睾丸组织结构、超微结构、氧化应激和Nrf2蛋白、γH2AX蛋白表达的影响,及六味地黄丸对其可能的作用。方法:50只清洁级健康SD雄性大鼠随机均分为五组,每组10只,分别为:正常组,2h辐射组,4h辐射组,2h给药组,4h给药组。正常组不辐射,其余四组每天分别暴露于900MHz电磁辐射(370μW/cm2)辐射2h和4h,连续辐射30d,2h给药组和4h给药组在每次接受规定时间辐射后灌胃六味地黄丸混悬液(0.72g/kg.d),其余3组灌胃蒸馏水。实验结束后各组大鼠禁食不禁水12h,以10%水合氯醛腹腔麻醉处死取材。光镜、电镜分别观察大鼠睾丸组织结构和超微结构的变化,比色法检测睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽超氧化物酶(GSH-Px)氧化抗氧化指标变化,免疫组化和Western blot技术检测核因子相关因子-2(Nrf2)和DNA损伤修复相关蛋白(γH2AX)的表达情况。结果:1各组大鼠一般情况比较各组大鼠精神状态、行为活动、进食饮水量、二便排泄、皮毛等情况未见明显差异。2各组大鼠睾丸组织形态学的比较光学显微镜下观察大鼠睾丸组织形态学变化:正常组大鼠睾丸生精小管结构清晰完整,各级生精细胞排列整齐,层次分明,管腔内充满成熟精子;与正常组比较,2h辐射组大鼠睾丸生精小管结构清晰完整,小管内初级精母细胞和次级精母细胞层数未见明显减少,结构稍松散;与正常组比较,4h辐射组生精小管结构清晰,小管内精原细胞和初级精母细胞层清楚,次级精母细胞层结构稍模糊,管腔内成熟精子减少;与2h辐射组比较,2h给药组大鼠睾丸生精小管结构清晰完整,各级生精细胞排列整齐,层次分明,管腔内充满成熟精子,组织结构接近正常;与4h辐射组比较,4h给药组大鼠睾丸生精小管结构清晰完整,各层生精细胞较清楚,管腔内成熟精子较多。3各组大鼠睾丸超微结构的比较透射电子显微镜下观察大鼠睾丸超微结构变化:正常组大鼠睾丸生精小管基膜完整无增厚,细胞与细胞间未见明显间隙,细胞膜完整,胞质饱满,核清亮,线粒体结构未见明显损伤;与正常组比较,2h辐射组生精小管基膜肿胀增厚,支持细胞紧密连接分开,细胞与细胞之间的间隙明显增大,部分线粒体空泡化,同时可见线粒体髓样化;与正常组比较,4h辐射组生精小管基膜明显肿胀增厚,支持细胞紧密连接分开,细胞与细胞之间的间隙明显增大,精原细胞可见胞膜不完整、胞质碎片、胞核固缩,核周隙轻度扩张,线粒体畸形、空泡化,线粒体部分嵴融合消失;与2h辐射组比较,2h给药组睾丸生精小管基膜基本正常,支持细胞紧密连接基本正常,细胞间间隙缩小,接近正常,线粒体偶见空泡;与4h辐射组比较,4h给药组睾丸生精小管基膜肿胀明显减轻,支持细胞紧密连接基本正常,细胞间间隙明显缩小,未见明显胞膜损伤,胞核较清亮,线粒体结构基本正常。此外,2h辐射组和4h辐射组均可见睾丸生精小管基膜肿胀、支持细胞紧密链接分开、线粒体损伤等超微结构损伤,但4h辐射组损伤程度较2h辐射组为重。4各组大鼠睾丸组织mda、gsh含量和sod、gsh-px活性比较与正常组大鼠比较,2h辐射组和4h辐射组大鼠睾丸组织mda含量均明显增加(p0.01),gsh含量、sod活性和gsh-px活性显著降低(p0.01);与2h辐射组比较,2h给药组大鼠睾丸组织mda含量明显降低(p0.01),sod活性显著增加(p0.05),gsh含量和gsh-px活性无明显变化(p0.05);与4h辐射组比较,4h给药组大鼠睾丸组织mda含量明显降低(p0.01),sod活性和gsh含量显著增加(p0.01),gsh-px活性无明显变化(p0.05)。此外,与2h辐射组比较,4h辐射组大鼠睾丸mda含量明显增加(p0.01),sod活性和gsh含量显著减少(p0.01),gsh-px活性无明显变化(p0.05)。5免疫组化检测各组大鼠睾丸组织nrf2蛋白表达与正常组大鼠比较,2h辐射组和4h辐射组大鼠睾丸组织nrf2蛋白表达平均光度明显减少(p0.05),与2h辐射组比较,4h辐射组睾丸组织nrf2蛋白表达明显减少(p0.05);与2h辐射组比较,2h给药组睾丸组织nrf2蛋白表达明显增加(p0.05);与4h辐射组比较,4h给药组睾丸组织nrf2蛋白表达明显增加(p0.05)。6westernblot检测各组大鼠睾丸组织nrf2蛋白表达与正常组大鼠比较,各组大鼠睾丸组织nrf2蛋白表达平均灰度比值明显减少(p0.01);与2h辐射组比较,2h给药组睾丸组织nrf2蛋白表达显著增加(p0.01);与4h辐射组比较,4h给药组睾丸组织nrf2蛋白表达显著增加(p0.01)。此外,与2h辐射组比较,4h辐射组睾丸组织nrf2蛋白表达明显减少(p0.01)。7免疫组化检测各组大鼠睾丸组织γh2ax蛋白表达正常组γh2ax在精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞表达均强,与正常组比较,2h辐射组和4h辐射组γh2ax主要在精原细胞表达,而在初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞表达减弱。与正常组比较,2h辐射组、4h辐射组和4h给药组睾丸组织γh2ax蛋白表达平均光度值明显减少(p0.05)。分别与2h辐射组和4h辐射组比较,2h给药组和4h给药组γh2ax在精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞表达增强。与2h辐射组比较,2h给药组睾丸组织γh2ax蛋白表达明显增加(p0.05);与4h辐射组比较,4h给药组睾丸组织γh2ax蛋白表达明显增加(p0.05)。8westernblot检测各组大鼠睾丸组织γh2ax蛋白表达与正常组大鼠比较,各组大鼠睾丸组织γh2ax蛋白表达平均灰度比值显著减少(p0.01);与2h辐射组比较,4h辐射组睾丸组织γh2ax蛋白表达明显减少(p0.01)。与2h辐射组比较,2h给药组睾丸组织γh2ax蛋白表达明显增加(p0.01);与4h辐射组比较,4h给药组睾丸组织γh2ax蛋白表达明显增加(p0.01)。结论:1 900MHz手机频率电磁辐射致大鼠睾丸组织形态学变化无显著异常,但超微结构中线粒体损伤显著,大鼠睾丸组织氧化损伤加重,抗氧化酶活性降低,Nrf2和γH2AX蛋白在睾丸组织的表达减弱,辐射4小时较之2小时甚之,说明具有时间效应关系。2六味地黄丸可改善大鼠睾丸组织形态学及对超微结构的损伤,其机制可能与增加Nrf2在睾丸组织的表达,降低氧化损伤,增强γH2AX蛋白表达,修复DNA损伤有关,具体机制尚待进一步研究。
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【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】

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1 李乃谦;;熟地黄活性成分药理作用的研究进展[J];中国处方药;2017年01期

2 Pravin Suryakantrao Deshmukh;Kanu Megha;Namita Nasare;Basu Dev Banerjee;Rafat Sultana Ahmed;Mahesh Pandurang Abegaonkar;Ashok Kumar Tripathi;Pramod Kumari Mediratta;;Effect of Low Level Subchronic Microwave Radiation on Rat Brain[J];Biomedical and Environmental Sciences;2016年12期

3 李e，

本文编号：1648277