EGCG对TNBS诱发结肠炎的治疗作用及滴丸制剂的研究

发布时间：2018-03-31 07:14

  本文选题：儿茶素没食子酸酯　切入点：滴丸　出处：《广州中医药大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:表儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)具有抗炎、抗肿瘤、抗缺血等活性作用。剂型对发挥药效作用具有重要意义,本实验主要考察EGCG滴丸制备的影响因素以确定其工艺流程,并建立鉴别及含量测定的方法。观察EGCG灌胃给药对三硝基苯磺酸(TNBS,C3H3N3O9S)/酒精(CH3OH)诱导的大鼠实验性结肠炎的治疗作用,确定其有效剂量,为EGCG滴丸制剂的开发奠定基础。方法:(1)通过预试验分析EGCG滴丸制备的主要基质和影响因素,以滴丸的圆度以及拖尾形状作为观察指标,用单因子变量(single variable)法研究EGCG与基质配比、管口温度、滴制温度对EGCG滴丸成形的影响,以正交试验法(orthogonal test)优化工艺路线,并采用薄层色谱和高效液相色谱法分别对EGCG进行鉴别和含量测定。(2)将48只SD大鼠按照等概率随机分6组,雌雄各半,每组8只;造模组每只腹腔注射3.5mL/kg水合氯醛,麻醉后再以50.0mg/kg三硝基苯磺酸(C3H3N3O9S)与等体积的50.0%酒精(CH3OH)混合溶液灌肠以诱发SD大鼠患结肠炎。实验分为 EGCG 低剂量(25.0mg/kg/day)组、EGCG 中剂量(50.0mg/kg/day)组、EGCG高剂量(75.0mg/kg/day)组、柳氮磺吡啶(SASA,100.0mg/kg/day)组、正常对照组和模型对照组。1周后,进行SD大鼠疾病活动指数(DAI)、结肠组织炎症指标(CMDI)和病理组织学(HPS)评分;NF-κBp65蛋白的表达使用S-P免疫组化法进行检测;大鼠血清IL-4、IL-10和TNF-α和大鼠结肠组织中的髓过氧化物酶活性(MPO)均以酶联免疫法(ELISA)检测。结果:(1)用94gPEG6000和6g的硬脂酸混合基质,80℃水浴50.0min,加入20g的EGCG后继续加热1h,混合液通过2mm(内径)的6孔滴头,管口温度55℃,滴距为5～8cm,350～380滴·min-1恒速滴入二甲基硅油中得到较为理想的EGCG滴丸。薄层鉴别表明EGCG滴丸样品与EGCG标准品在同一水平位置有黑色斑点。高效液相测定中标准品EGCG的进样量(C)在0.06880～0.50112μg范围内与锋面积(A)的线性方程为A=1214.4C-8.2478,用于测定EGCG的含量;滴丸的平均回收率和RSD分别为101%、3.91%。(2)给药 1 周后,SASA(100.0mg/kg/day)组、EGCG(50.0mg/kg/day)组和EGCG(75.0mg/kg/day)组SD大鼠DAI评分、结肠组织CMDI和HPS评分均低于模型对照组(P0.05);SASA(100.0mg/kg/day)组、EGCG(25.0mg/kg/day)组、EGCG(50.0mg/kg/day)组、EGCG(75.0mg/kg/day)组结肠组织蛋白NF-κBp65的表达低于模型对照组(P0.05);SASA(100.0mg/kg/day)组、EGCG(50.0mg/kg/day)组、EGCG(75.0mg/kg/day)组结肠组织MPO活性低于模型对照组(P0.05),而EGCG(25.0mg/kg/day)组、模型对照组基本相同(P0.05);模型对照组的血清IL-4、TNF-α 的蛋白含量高于 SASA(100.0mg/kg/day)组、EGCG(50.0mg/kg/day)组以及 EGCG(75.0mg/kg/day)组(P0.05);SASA(100.0mg/kg/day)组、EGCG(50.0mg/kg/day)组、EGCG(75.0mg/kg/day)组与模型对照组相比血清 IL-10的蛋白含量偏高(P0.05)。结论:(1)EGCG滴丸的成形性受基质的影响较大,加入硬脂酸可提高滴丸的得率;本试验获得了 EGCG滴丸的工艺路线,并初步建立了鉴别及含量测定的方法;薄层鉴定和高效液相测定法与现有同类制剂的一致,为进一步建立EGCG滴丸质量标准提供参考。(2)90%EGCG在50.0和75.0mg/kg/day浓度下可改善SD大鼠结肠炎症状,降低结肠组织中NF-κBp65蛋白的表达和MPO的活性,同时降低血清IL-4、TNF-α和升高血清IL-10的水平,提示其对溃疡性结肠炎有一定的作用。
[Abstract]:Objective : To study the effect of egcg on experimental colitis induced by trinitrobenzene sulfonic acid ( TNBS , C3H3N3O9S ) / alcohol ( CH3OH ) . (2)灏，

本文编号：1689706