黄芪、冬虫夏草对新生鼠肾积水病肾TGF-β1、IGF-1表达的影响

发布时间：2018-05-09 05:04

  本文选题：新生鼠 + 肾积水　； 参考：《遵义医学院》2014年硕士论文

【摘要】：目的：通过制作腰大肌压迫输尿管，建立新生鼠肾积水动物模型。应用黄芪、冬虫夏草提取液对新生鼠肾积水动物模型进行皮下注射，检测动物模型中梗阻建立后病肾组织转化生长因子-β1（TGF-β1）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的表达变化，以及检测病肾尿TGF-β1、IGF-1的水平。以探讨黄芪、冬虫夏草对新生鼠肾积水病肾的损害有否保护作用，从而为临床更好地治疗先天性肾积水提供一种新的思路。 方法： 1、动物模型的建立选用生后48h内的Wistar新生鼠96只，随机分为8组，每组12只。随机选择1组行假手术，作为对照组；余7组采用腰大肌压迫部分左输尿管制作新生鼠肾积水动物模型，任选其中1组作为模型组，余各组再随机分为干预1组~干预6组： ①、组1：对照组（假手术组）：手术后（术中暴露左输尿管后即关闭手术切口）Wistar新生鼠皮下注射生理盐水（1ml/kg/天）。 ②、组2：模型组：手术后（术中建立左侧输尿管部分梗阻模型）Wistar新生鼠皮下注射生理盐水（1ml/kg/天）。 ③、干预1组（黄芪组1-低剂量组）：动物模型建立后Wistar新生鼠皮下注射低剂量的黄芪注射液（1ml/kg/天），饲养3周标本取材后、颈椎脱髓法处死动物。 ④、干预2组（黄芪组2-高剂量组）：动物模型建立后Wistar新生鼠皮下注射高剂量的黄芪注射液（3ml/kg/天），饲养3周标本取材后、颈椎脱髓法处死动物。 ⑤、干预3组（冬虫夏草组1-低剂量组）：动物模型建立后Wistar新生鼠皮下注射低剂量的冬虫夏草提取液（0.5ml/kg/天），饲养3周标本取材后、颈椎脱髓法处死动物。 ⑥、干预4组（冬虫夏草组2-高剂量组）：动物模型建立后Wistar新生鼠皮下注射高剂量的冬虫夏草提取液（2.0ml/kg/天），饲养3周标本取材后、颈椎脱髓法处死动物。 ⑦、干预5组（低剂量黄芪+冬虫夏草组-低剂量组）：动物模型建立后Wistar新生鼠皮下注射低剂量的黄芪注射液（1ml/kg/天）和冬虫夏草提取液（0.5ml/kg/天），饲养3周标本取材后、颈椎脱髓法处死动物。 ⑧、干预6组（高剂量黄芪+冬虫夏草组-高剂量组）：动物模型建立后Wistar新生鼠皮下注射高剂量的黄芪注射液（3ml/kg/天）和冬虫夏草提取液（2.0ml/kg/天），，饲养3周标本取材后、颈椎脱髓法处死动物。 2、各种指标的检测：(1)、采集下列各组：对照组、模型组、干预组1-6的病肾组织标本，部分-80℃冰箱保存、部分甲醛固定后做成石蜡标本待检：①、石蜡标本切片进行HE染色后、光镜下观察组织结构的变化；②、石蜡标本切片后、通过免疫组织化学PV法检测转化生长因子-β1（TGF-β1）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的表达，应用Image-ProPlus图像分析软件测量平均光密度值；③、采用RT-PCR技术检测病肾组织内TGF-β1mRNA、 IGF-1mRNA的表达变化；(2)、动物处死时收集各组病肾肾盂尿液，应用ELISA法检测尿TGF-β1、尿IGF-1的水平。 结果： 1、动物模型建立期间，动物的存活情况： 新生Wistar鼠共96只，建立肾积水梗阻模型及喂养期间死亡5只（麻醉过深致死1只、术中死亡2只、喂养期间死亡2只），存活91只（94.79%）。 2、病肾组织形态学的变化： (1)、肉眼观：对照组双肾大小、形态一致，肾包膜光整，肾实质质地等同；模型组病肾明显增大，肾包膜张力高，肾包膜与肾实质粘连重、不易分离，肾实质菲薄如纸，肾盂明显扩张、积水；干预组：病肾增大，但小于模型组病肾，肾实质薄，肾盂扩张、积水。 （2）、光镜下病肾组织结构的变化： 对照组：双肾肾小球结构、肾小管结构发育正常，肾小囊未见扩张。模型组：病肾肾小球结构形态怪异、失常，肾小球鲍曼氏囊明显扩张，肾小管明显扩张。干预组：病肾肾小球形态结构异常，肾小球鲍曼氏囊轻度扩张，肾小管扩张，但肾小球、肾小管的损害较模型组明显减轻，随药物剂量的增大、以及联合用药，病肾组织结构的损害呈逐渐减轻的趋势。 3、病肾组织内TGF-β1、IGF-1蛋白水平与转录水平的表达 对照组肾组织内TGF-β1低表达，TGF-β1mRNA也低表达；肾组织内IGF-1高表达，IGF-1mRNA也高表达。模型组病肾组织内TGF-β1高表达，TGF-β1mRNA表达明显升高；病肾组织内IGF-1低表达，IGF-1mRNA表达明显减低。干预各组病肾组织内TGF-β1均有不同程度的表达，低剂量组病肾TGF-β1的表达比高剂量组、联合用药组增多，但仍明显低于模型组；在病肾组织内IGF-1也有不同程度的表达，但低剂量组病肾IGF-1的表达比高剂量组、联合用药组减低，仍明显高于模型组。对照组与模型组病肾组织中相应TGF-β1、IGF-1水平间比较，差异均有统计学意义（P0.05），模型组与干预各组病肾组织中相应TGF-β1、IGF-1水平间比较，差异也有统计学意义（P0.05），对照组与干预各组病肾组织中相应TGF-β1、IGF-1水平间比较，差异无统计学意义（P0.05）。干预各组相应的低剂量组与高剂量组病肾组织TGF-β1、IGF-1水平间比较，差异无统计学意义（P0.05）。 4、各组病肾肾盂尿内TGF-β1、IGF-1水平的变化 在对照组中肾盂尿液TGF-β1含量低，而IGF-1含量高。模型组中病肾肾盂尿液中TGF-β1含量高，而IGF-1含量低。干预各组病肾肾盂内尿液TGF-β1、IGF-1水平介于对照组与模型组之间。对照组与模型组相应病肾尿TGF-β1、IGF-1水平间比较，差异均有统计学意义（P0.05）；模型组与干预各组相应病肾尿TGF-β1、IGF-1水平间比较，差异也有统计学意义（P0.05）；对照组与干预各组相应病肾尿TGF-β1、IGF-1水平间比较，差异无统计学意义（P0.05）。干预各组相应的低剂量组与高剂量组病肾尿TGF-β1、IGF-1水平间比较，差异无统计学意义（P0.05）。 结论： 1、应用黄芪、冬虫夏草对新生鼠肾积水动物模型进行皮下注射表明：新生鼠病肾组织及尿内TGF-β1的表达较模型组减低，而病肾IGF-1水平较模型组升高。 2、黄芪、冬虫夏草可能通过下调新生鼠肾积水病肾组织内TGF-β1的表达、或/和上调病肾IGF-1水平，从而对新生鼠肾积水病肾的损害有一定的保护作用。
[Abstract]:Objective : To establish an animal model of neonatal rat renal hydrops by making lumbar muscle compression ureter . The expression of TGF - 尾1 ( TGF - 尾1 ) , insulin - like growth factor - 1 ( IGF - 1 ) and the level of TGF - 尾1 and IGF - 1 were detected in animal model .

Method :

1 . 96 Wistar rats were randomly divided into 8 groups randomly divided into 8 groups ( n = 12 ) .
The rats were randomly divided into the intervention group 1 group and the intervention group 6 group .

Group 1 : Control group ( sham operation group ) : normal saline ( 1 ml / kg / day ) was injected subcutaneously into Wistar neonatal rats after operation ( i.e . , the operation incision was closed after the left ureter was exposed ) .

( 2 ) Group 2 : Model group : After operation ( the left ureter partial obstruction model was established ) , the rats were subcutaneously injected with physiological saline ( 1 ml / kg / day ) .

( 3 ) Group 1 ( 1 - low - dose group ) : A low - dose astragalus injection ( 1 ml / kg / day ) was injected subcutaneously into Wistar rats after the animal model was established , and the animals were sacrificed after three weeks of feeding .

4 . Intervention group 2 ( astragalus group 2 - high dose group ) : Wistar rats were subcutaneously injected with high - dose astragalus injection ( 3 ml / kg / day ) after the animal model was established . After 3 weeks of feeding , the animals were sacrificed .

( 5 ) The rats were treated with low - dose Cordyceps extract ( 0.5 ml / kg / day ) by subcutaneous injection of low - dose Cordyceps sinensis ( 0.5 ml / kg / day ) after the animal model was established , and the animals were sacrificed after 3 weeks of feeding .

6 . Intervention 4 groups ( Cordyceps group 2 - high dose group ) : A high - dose Cordyceps extract ( 2.0ml / kg / day ) was subcutaneously injected into Wistar rats after the animal model was established , and the animals were sacrificed after three weeks of feeding .

7 . Intervention 5 groups ( low - dose astragalus + cordyceps group - low - dose group ) : Wistar rats were subcutaneously injected with low - dose astragalus injection ( 1 ml / kg / day ) and Cordyceps extract ( 0.5 ml / kg / day ) after the animal model was established , and the animals were sacrificed after three weeks of feeding .

8 . Intervention 6 groups ( high - dose astragalus + Cordyceps group - high - dose group ) : Wistar rats were subcutaneously injected with high - dose astragalus injection ( 3 ml / kg / day ) and Cordyceps extract ( 2.0ml / kg / day ) after the animal model was established , and the animals were sacrificed after 3 weeks after feeding .

2 . Detection of various indexes : ( 1 ) The following groups were collected : control group , model group , and intervention group 1 - 6 disease kidney tissue specimen , part -80 鈩

本文编号：1864691