盐酸曲美他嗪影响自噬相关蛋白对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

发布时间：2018-08-31 07:45

【摘要】：目的观察盐酸曲美他嗪(TMZ)的处理对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤的保护,及其与自噬相关蛋白--微管相关蛋白轻链3蛋白-Ⅱ(LC3-Ⅱ)和自噬流另一标志物Sequestosome 1(p62/SQSTM1)的关系,并探讨其作用机制。方法雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠54只,体重范围在230 g-270 g之间,构建大鼠在体心肌缺血再灌注损伤(MIRI)模型。浓度为10%的水合氯醛给予大鼠腹腔注射麻醉,气管插管连接呼吸机辅助大鼠呼吸。在大鼠左胸心尖搏动最明显处,作切口开胸,暴露出心脏,使用5～0带针缝合线穿过心肌围绕冠状动脉左前降支打一活结。扎紧缝合线致左室壁心肌缺血30分钟后,剪断缝合线,恢复冠状动脉左前降支(LAD)血供。假手术组大鼠实行开胸等一系列手术,只是使用缝合线穿过心肌后不打结,不阻断LAD血液供应。为了观察LC3-Ⅱ和p62在I/R损伤和正常心肌组织中的变化水平,本实验随机将雄性SD大鼠分为三组:假手术组(Sham组)、单纯心肌缺血再灌注模型组(I/R组)以及TMZ对心肌缺血再灌注损伤预处理组(I/R+TMZ组)。手术成功后I/R+TMZ组将TMZ溶于生理盐水中,给予TMZ溶液(20 mg/kg · d)灌胃直至取材,Sham组和I/R组给予同体积生理盐水灌胃直至取材。于成模后即刻、第4周和第8周分别处死各组大鼠,取心室前壁心肌进行HE染色,观察心肌组织形态学变化,RT-PCR检测LC3-Ⅱ及p62 mRNA的表达水平,Wester blotting测定LC3-Ⅱ及p62蛋白的表达水平。统计学比较各组内、组间、各时相上述变化的差异。结果1.TMZ对大鼠心肌组织中LC3-Ⅱ和p62表达的影响组内之间比较,I/R组大鼠造模成功后即刻取材的心肌细胞中LC3-Ⅱ和p62 mRNA和蛋白的表达水平较第4周取材的表达水平降低(P0.05),造模成功后第8周取材的心肌细胞较造模后第4周取材的表达水平增高(P0.05);I/R+TMZ组大鼠造模成功后即刻取材的心肌细胞中LC3-Ⅱ和p62 mRNA和蛋白的表达水平较第4周取材的表达水平降低(P0.05),造模成功后第8周取材的心肌细胞较造模后第4周取材的表达水平增高(P0.05)。组间相比较,I/R组中各时相LC3-Ⅱ、p62mRNA和蛋白水平均比Sham组各时相增高(P0.05);与I/R组各时相相比较,I/R+TMZ组各时相的LC3-Ⅱ和p62 mRNA和蛋白的表达水平降低(P0.05)。I/R+TMZ组与Sham组各时相中LC3-Ⅱ、p62mRNA和蛋白的表达水平差异无统计学意(PO.O5)。2.盐酸曲美他嗪对大鼠心肌组织形态学变化的影响I/R组大鼠从成模即刻后到第4周取材,其心肌细胞损害逐渐加重,出现炎性细胞明显浸润、细胞肿胀和断裂、核着色不均及明显坏死灶,I/R+TMZ组成模即刻的炎性变化同I/R组,第8周取材发现心肌组织的损害有所恢复,术后第8周即与Sham组差异不大。结论TMZ的干预可能通过调节自噬流对大鼠I/R损伤的心肌起保护作用,并存在一定的时间效应。
[Abstract]:Objective to investigate the protective effect of trimetazidine hydrochloride (TMZ) on myocardial ischemia-reperfusion (I / R) injury in rats, and its relationship with autophagy associated protein-microtubule-associated protein light chain 3 protein-鈪，

本文编号：2214346