改性壳聚糖联合甲基泼尼松龙对大鼠坐骨神经损伤修复的相关研究

发布时间：2018-11-15 12:50

【摘要】：目的：研究表明改性壳聚糖是一种天然聚阳离子生物多糖,具有优良的生物相容性和生物可降解性,已广泛应用于腹腔术后的防粘连治疗,也在神经修复、皮肤修复、骨及软骨修复等方面表现出广泛的应用前景。甲基泼尼松龙是一种中效糖皮质激素,具有抗炎、免疫抑制以及改善损伤神经附近微环境的作用,有研究证实在周围神经损伤后应用甲基泼尼松龙可促进神经再生。本实验通过联合应用改性壳聚糖与甲基泼尼松龙,观察对SD大鼠坐骨神经离断吻合术后神经再生修复所起的作用,探索有效、安全的改善周围神经损伤再生与修复的新方法。方法：6周龄SD(Sprague-Dawley)大鼠60只,雌雄不限,质量160-200 g,随机分为5组,每组12只：A改性壳聚糖组,B甲基泼尼松龙组,C改性壳聚糖与甲基泼尼松龙联合治疗组,D生理盐水对照组,E假手术组。ABCD四组SD大鼠于坐骨结节与股骨大转子连线和坐骨神经相交处用手术刀片切断坐骨神经,并在手术显微镜下,将切断的坐骨神经用9-0带线缝合针行神经外膜端端缝合,神经外膜缝合4-6针。显微吻合后立即根据分组不同于神经吻合口周围注入不同药物进行干预(A组改性壳聚糖1m1；B组甲基泼尼松龙10mg；C组改性壳聚糖1m1+甲基泼尼松龙10mg；D组生理盐水1m1),E组假手术组游离坐骨神经后不切断。术后每组大鼠缝合切口,肌注庆大霉素,预防感染。术后每天观察SD大鼠展爪反射恢复、右下肢肿胀、皮肤溃疡、足趾脱落等一般情况,并于术后4,8,12周测定坐骨神经传导速度、腓肠肌湿质量残存率、腓肠肌细胞直径及截面积,坐骨神经粘连,光镜及透射电镜观察坐骨神经组织学变化。结果：实验SD大鼠60只,实验过程中无大鼠意外死亡及术后感染发生,实验过程中无数据脱失。所有大鼠术后8天右侧股后部皮肤伤口全部愈合。ABCD四组坐骨神经切断并吻合大鼠,术后麻醉复苏后即出现右下肢瘫痪症状,并逐渐出现右下肢失神经性皮肤营养不良表现。A组第25天开始展爪反射恢复,第32天全部恢复。B组第25天开始恢复,第33天全部恢复。C组于第22天出现恢复,第28天全部恢复。D组第26大开始恢复,第38天全部恢复。E组术后展爪反射未消失。结果显示C组较A组B组早,具有统计学差异(P0.05),A组与B组相比,展爪反射恢复时间类似,相比无统计学意义(P0.05)。术后第4周、8周、12周,在体测量坐骨神经传导速度：在3个时间节点中,E组坐骨神经传导速度最快,ABCD四组明显慢于E组。D组生理盐水对照组坐骨神经传导速度最慢。C组坐骨神经传导速度快于A组与B组及D组,具有统计学差异(P0.05)。A组坐骨神经传导速度稍稍快于B组,差异无统计学意义(P0.05)。术后第4周、8周、12周,测定腓肠肌湿质量残存率表明：随着术后时间延长,ABCD四组大鼠腓肠肌湿质量残存率逐渐下降,其中D组下降最快。E组湿质量残存率明显高于ABCD四组,比较有统计学差异(P0.05)。C组与ABD组相比,湿质量残存率下降明显较慢,具有统计学差异(P0.05)。术后第4周、8周、12周,测量腓肠肌直径及计算截面积显示：随着术后时间延长,ABCD四组腓肠肌肌细胞直径及截面积进行性减小；与E组相比较,D组直径及截面积减小最多(P0.05),在同一时间节点上,A组、B组及C组腓肠肌肌细胞直径及截面积减小较少。C组与ABD三组相比,直径及截面积减小明显较小,差异具有统计学意义(P0.05)。术后第4周、8周、12周,观察坐骨神经粘连情况表明：D组坐骨神经与周围组织粘连较重,不易分离。E组亦存在较重粘连。A组、B组及C组粘连情况较D组及E组为轻。在ABC三组中,C组粘连情况相对较轻,相比具有统计学意义(P0.05)。术后12周时电镜观察：E组假手术组可见神经纤维无明显分散,排列有序,髓鞘境界清晰,未见明显髓鞘脱失。D组生理盐水对照组可见神经纤维、树突、轴突及细胞器均严重变性及坏死,膜结构不清,多见空泡状改变,髓鞘排列杂乱、相互融合、溶解,髓鞘完整性严重破坏。C组改性壳聚糖与甲基泼尼松龙联合治疗组可见神经纤维束及树突、轴突、胞体等结构,细胞膜及细胞器均较清楚,纤维排列稍紊乱,胞体内膜结构及形态较正常稍差,部分胞体轻度水肿及变性。A组改性壳聚糖组可见神经纤维排列尚有序,未见明显变性,部分细胞器变性,部分膜结构不清,欠光滑,细胞器变性变形,可见空泡变,部分染色质凝集固缩,但优于E组假手术组及D组生理盐水对照组。B组甲基泼尼松龙组镜下所见类似于改性壳聚糖组。结论：1.改性壳聚糖、甲基泼尼松龙均能防治周围神经损伤后吻合口附近粘连和瘢痕增生。改性壳聚糖与甲基泼尼松龙联合使用后,明显减少粘连和瘢痕发生率。2.改性壳聚糖与甲基泼尼松龙联合使用能够促进周围神经离断吻合后神经再生及终末器官支配,促进周围神经再生修复。3.实验结果证实采用改性壳聚糖联合甲基泼尼松龙治疗有利于促进大鼠坐骨神经损伤的再生修复,但功能恢复仍不能达到周围神经损伤前水平,仍需要进一步研究探索周围神经损伤修复的新方法。
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【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R688

【参考文献】