梓醇不同给药方式药动学研究

发布时间：2018-11-21 10:51

【摘要】：地黄作为传统四大怀药之一,是常用的滋补类中药,在中药处方中使用广泛。其主要活性成分梓醇具有防治痴呆、抗脑缺血、利尿、降血糖等多种生物活性,有较大的药用价值。但现有文献提示梓醇不同给药途径出现剂量效应差异显著,其原因尚未探明。本研究拟采用ALX致糖尿病模型,来验证不同途径给予梓醇出现降糖作用是否出现剂量上的巨大差异；在此基础上研究(1)胃肠理化环境(酸碱度)对梓醇稳定性的影响；(2)肝微粒体酶对梓醇代谢的影响；(3)考察梓醇不同给药途径的药代动力学差异。以期探索梓醇不同给药途径出现治疗作用剂量差异的可能机制,为梓醇的后期成药研究,如给药途径和剂型选择等提供前期研究基础。第一部分：梓醇不同方式给药下对ALX致糖尿病大鼠的治疗作用考察不同给药方式下,梓醇对糖尿病大鼠治疗作用的差异。正常组大鼠为随机选取8只大鼠,普通饲养,不做任何处理。造模方法是大鼠在禁食不禁水的情况下喂养12小时后,采取两步给药法,腹腔注射新鲜配制的1%四氧嘧啶生理盐水溶液制备糖尿病模型：第1天一次性腹腔注射1%四氧嘧啶120mg/kg,第2天一次性补注100mg/kg。后经过72h的自由饮食后,禁食12h于眼眶取血用血糖仪测定血糖值,挑选血糖值大于16.7mmol/L的大鼠作为糖尿病大鼠模型。均以500mg/kg二甲双胍作为阳性对照药物,药物分为梓醇灌胃亚组(50、100、200mg/kg)和静脉注射亚组(5、10、20mg/kg),从造模成功后开始给药,正常组和模型组大鼠静脉注射相应体积的生理盐水,1次/d,连续注射两周。考察梓醇对其血糖血脂水平和糖耐量的影响。结果表明,不同的给药方式对降糖降脂效应的剂量有明显差异,灌胃给药梓醇具有明显降糖降脂作用的剂量为200mg/kg;而静脉注射梓醇5、10、20mg/kg剂量均有明显降糖降脂,改善糖耐量水平作用,呈明显的量效依赖性。第二部分：梓醇不同给药剂量差异显著原因探索为了对梓醇不同方式给药导致疗效差异较大的原因进行探讨,我们对梓醇在不同PH条件下的稳定性,肝微粒体代谢,梓醇不同方式给药的药动学进行研究。实验一胃肠理化环境(酸碱度)对梓醇稳定性的影响考察梓醇在酸碱环境中的化学稳定性,使梓醇在PH值分别为1、2、3、5、7.4、9、12的溶液,37℃条件下保留,并14h取样测定梓醇浓度变化情况。SD大鼠,禁食36h,用3.5%水合氯醛麻醉,剪开腹部肌肉,暴露胃,于贲门处插管并结扎责门,于幽门处插管并结扎幽门,用去胃蛋白酶的人工胃液5m1洗涤大鼠胃2次后,于胃中注入5m1人工胃液保留2h,取样测定梓醇浓度变化情况；SD大鼠,禁食36h,用3.5%水合氯醛麻醉,剪开腹部肌肉,暴露肠道,于屈氏韧带下10cm,距回盲部上10cm插管并结扎。用人工肠液20m1洗涤大鼠肠道2次,于肠中注入10m1人工肠液保留2h,取样测定梓醇浓度变化情况。结果表明梓醇在PH为1,2,3时,较不稳定。随着时间的变化,呈线性下降趋势,酸度越高,下降越快。当PH5时,随时间变化不大。PH为碱性时,梓醇浓度也无明显变化。说明梓醇在酸性环境下易破坏,在碱性条件下相对稳定。梓醇在灌胃人工胃液中的浓度变化显示：随着时间的变化,梓醇浓度下降明显,呈现线性下降趋势；梓醇在灌肠人工胃液中的浓度变化显示：随着时间的变化,梓醇浓度下降明显,呈现线性下降趋势,但下降速度不如在灌胃保留液中明显。实验二梓醇在肝微粒体酶中的代谢情况考察梓醇在肝微粒体酶中的代谢情况,了解肝微粒体酶对梓醇的稳定性的影响。整个肝微粒体孵化体系约0.5m1,其中缓冲体系为0.1mol/L Tris-HCl缓冲溶液(PH=7.4),梓醇10mg/L,肝微粒体蛋白lg/L, MgCl210mmol/L, KC110mmol/L,系统37℃水浴5min,加入同样预热的反应启动液NADPH lmmol/L开始,于水浴反应30min,取出放入冰浴终止反应。并对反应时间,蛋白浓度,梓醇浓度做了筛选,得到最优反应条件；选出最优条件后通过底物消除法对酶促动力参数Km、Vmax和CLint进行了测定；最后测定CYP450酶亚型专属性抑制剂对梓醇代谢的抑制作用以及抑制作用大小,鉴别出参与梓醇的代谢的CYP450酶亚型。梓醇在0～60min孵育,其中0～30min内线性较好；梓醇在蛋白浓度为0.2～2.0g/L范围内孵育,梓醇在蛋白浓度0.2～1g/L范围内蛋白质量浓度增加,梓醇消除线性增加,所以梓醇在微粒体中孵育蛋白浓度确认为1.0g/L；不同浓度的梓醇(浓度2～100mg/L)在蛋白浓度为1.0g/L的微粒体中孵育30min,当底物浓度10mg/L时,梓醇的代谢速率开始减慢,当底物浓度50mg/L时,减慢比较明显,所以梓醇在微粒体中的孵育的最佳浓度选取了10mg/L。通过底物消除法公式,绘图计算后,得到梓醇在肝微粒体中的代谢Vmax为3.24mg/(L·min·mg), Km为0.44mg/L, CLint为7.3mL/(min·mg)。结果表明,CYP2C19的特异性抑制剂噻氯匹啶在较低浓度(1.25μ mol/L)即对肝微粒酶对梓醇的代谢其抑制作用,且40μmol/L抑制效果大于50%,为强效抑制剂；CYP3A4的特异性抑制剂酮康唑在0.1μ mol/L即可对梓醇代谢其显著抑制作用且4μmol/L时抑制效果大于50%,为强效抑制剂。CYP2D6的特异性抑制剂奎尼丁在1μmol/L时也表现出对梓醇代谢的抑制作用,20μmol/L时抑制效果在20～50%之间,为中效抑制剂。而其他药物对梓醇的代谢无显著影响,即梓醇主要通过CYP2C19,CYP3A4,CYP2D6发生代谢作用。实验三考察梓醇不同给药途径(肌注,灌胃,静注)的药代动力学差异研究梓醇在不同给药途径(肌注,灌胃,静注)的药代动力学参数差异。取SPF级SD大鼠18只,实验前禁食12h,随机分为3组,分别进行灌胃,后腿肌肉注射,尾静脉注射给药,给药剂量50mg.kg-1,于给药前(0min)和给药后2、5、15、30、60、120、180、300、480、600min,眼眶动脉采血,血样经处理后进行HPLC分析。将所得的血药浓度-时间数据,用DAS3.5中统计矩方法求算药代动力学参数。结果表明,梓醇在口服,肌注和静注后,药动学参数显示,口服半衰期(t1/2z=1.39±0.22h)显著长于肌注(t1/2z=0.84±0.41h)和静注(t1/2z=0.68±0.24h),这可能是口服吸收时间较长所致。口服梓醇体内滞留时间MRT为3.23±0.37h,长于肌注MRT(1.62±0.20h)和静注MRT(1.71±0.29h),和静注比具有显著性差异(P0.01)。肌肉注射吸收迅速,Tmax为0.25±0.1h显著短于口服1.66±0.58h。一般认为,大鼠Vz/F小于5L指药物主要分布于血浆,所以口服1.17±0.16L/kg,肌注Vz/F为0.40±0.20L/kg,静注Vz/F为0.57±0.19L/kg,都代表药物主要分布于血浆。肌注生物利用度为71.63%大于口服的49.38%。梓醇在胃肠道不稳定,但是其灌胃生物利用度接近50%,这结果和梓醇灌胃和静脉注射治疗糖尿病疗效相差近10倍有差异,原因可能和梓醇在体内产生的代谢产物有关。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：西南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R285.5

【参考文献】