tBHQ对大鼠蛛网膜下腔出血后的脑保护和认知功能的改善作用及其机制的研究

发布时间：2018-12-20 14:09

【摘要】：目的：建立大鼠蛛网膜下腔出血（SAH subarachnoid hemorrhage）后早期脑损伤模型，并研究tBHQ对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤是否具有保护作用。方法：48只正常的健康、雄性SD大鼠，随机分成对照组，SAH组，安慰剂组以及tBHQ处理组，抽取大鼠股动脉自体血，并注入视交叉池，以建立蛛网膜下腔出血模型。tBHQ通过胃内灌注给药，剂量为12.5mg/kg，分别在SAH后2小时、12小时、24小时、36小时给药，并在蛛网膜下腔出血后48处死，取大鼠血凝块周围的皮层脑组织（额颞底）做标本，测定水肿指数和血脑屏障的变化。探讨tBHQ对大鼠蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤是否具有保护作用。结果：48小时后测定的SAH组的水肿百分数达82.50%，测定的脑组织EB含量为21.9ng/mg；而tBHQ治疗后，tBHQ组的脑水肿百分数为80.60%，脑组织的EB含量为13.6ng/mg；SAH与安慰剂组则无明显差异。结论：1.通过建立SD大鼠蛛网膜下腔出血模型，可以监测到SD大鼠蛛网膜下腔出血后48小时后脑组织水肿指数明显增加，血脑屏障明显破坏，说明SD大鼠在蛛网膜下腔出血后48小时存在早期脑损伤。2.tBHQ治疗后，能显著降低蛛网膜下腔出血后的脑水肿指数，改善血脑屏障。提示tBHQ对SD大鼠蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤具有神经保护作用。目的：建立大鼠蛛网膜下腔出血（SAH subarachnoid hemorrhage）模型，研究tBHQ对大鼠认知功能的影响。方法：40只成年健康雄性SD大鼠，随机分为四组：正常组、SAH组、安慰剂组和tBHQ治疗组，方法同前。观察SD大鼠行为功能变化，进行神经功能评分，在SAH后48小时开始进行Morris水迷宫试验测试大鼠的认知功能。结果：1.与对照组相比，SAH组大鼠的神经认知功能、食欲及活动能力明显下降（P0.01）；tBHQ组与安慰剂组相比，神经认知功能、食欲及活动能力明显增强（P0.01）；SAH组和安慰剂组之间无统计学意义（P0.05）。2.在Morris水迷宫试验中，SAH组及安慰剂组比对照组大鼠的学习记忆功能明显下降（P0.01），而SAH组及安慰剂组无统计学差异（P0.05）；tBHQ治疗后，大鼠的学习认知能力显著增强（P0.01）。结论：SAH后大鼠的认知功能明显下降，tBHQ能改善SAH后大鼠的认知功能。目的：研究SD大鼠蛛网膜下腔出血后颞底皮层中Keap1/Nrf2/ARE通路及其下游的表达产物的变化以及tBHQ对此传导通路的影响，进一步探讨tBHQ对SD大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的神经保护作用的机制。方法：参照第二部分。SAH后48小时后再次麻醉大鼠，取颞底皮层组织做标本，采用TUNEL和FJB技术测定神经细胞凋亡、坏死指数；采用Western blot法测定Keap1、Nrf2、HO-1的表达情况；EMSA法测定Nrf2的结合活性；采用免疫组化法检测Keap1、Nrf2、HO-1的表达；RT-PCR测定HO-1, NQO1和GST-α1的mRNA表达；酶活性检测NQO1、GST-α1、MDA、SOD和GSH-Px的水平。结果：TUNEL和FJB测定的神经细胞凋亡、坏死指数显示：对照组中神经细胞存在凋亡、坏死，与对照组相比，SAH组中神经细胞的凋亡、坏死指数明显升高（P0.01）；SAH组与安慰剂组相比较，无明显差异（P0.05）；tBHQ治疗组中神经细胞的凋亡、坏死指数明显低于SAH与安慰剂组（P0.01）。Western blot法测定结果显示对照组中的Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的表达较弱；与对照组相比，SAH组中的Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的水平明显增高（P0.05）；SAH组与安慰剂组相比，则无明显差异（P0.05）；而tBHQ组中Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的表达水平比SAH和安慰剂组进一步增高（P0.05）。EMSA结果显示：Nrf2的结合活性在对照组中较低；与对照组相比，Nrf2的结合活性在SAH组中明显增高（P0.05）；安慰剂组与SAH组相比无明显差别（P0.05）；tBHQ治疗后，Nrf2的结合活性比SAH组进一步增高（P0.05）。免疫组化结果显示对照组的Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的阳性率（细胞浆棕黄色染色表示阳性）较低；与对照组相比，SAH组中Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的阳性率显著增高（P0.05）；SAH组与安慰剂组相比，无明显差异（P0.05）；而tBHQ治疗组中Keap1、Nrf2、HO-1蛋白的阳性率相比SAH组和安慰剂组进一步增高（P0.05）。RT-PCR结果显示对照组中HO-1, NQO1和GST-α1的mRNA表达水平较弱；SAH组与对照组相比，HO-1, NQO1和GST-α1的mRNA表达水平明显升高（P0.05）；SAH组与安慰剂组相比较，无明显差异（P0.05）；而tBHQ治疗组中的HO-1, NQO1和GST-α1的mRNA表达水平明显高于SAH组（P0.05）。酶活性检测结果显示对照组中NQO1和GST-α1的酶活性较低；SAH组和安慰剂组中NQO1和GST-α1的酶活性则显著高于对照组（P0.05）；SAH组与安慰剂组无明显差异（P0.05）；tBHQ组中NQO1和GST-α1的酶活性明显高于SAH组（P0.05）。与对照组相比，SAH组中MDA的水平明显增高（P0.05），而SOD和GSH-Px的水平则显著下降（P0.05）；SAH组与安慰剂组无明显差异（P0.05）；在tBHQ治疗组中，，MDA水平比SAH组显著降低（P0.05），而SOD和GSH-Px的水平比SAH组明显增高(SOD, P 0.01; GSH-Px, P 0.05)。结论：1.SAH后早期能激活Keap1/Nrf2/ARE传导通路，并激活此通路下游的表达产物从而起到神经保护作用；2.tBHQ能进一步激活Keap1/Nrf2/ARE传导通路，从而对蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤起到神经保护作用。
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【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R743.35

【参考文献】