胎盘组织中KDM5C、BMP-7的表达及与重度子痫前期发病关系的研究

发布时间：2019-01-04 20:32

【摘要】：重度子痫前期(severe preeclampsia s PE)是一种多系统疾病,以高血压、蛋白尿和多系统受损为主要特征,是导致孕产妇和新生儿死亡率增加的主要原因之一,根据发病的时间,临床分型分为2种,分别为早发型重度子痫前期(34周)和晚发型重度子痫前期(≥34周),具体的发病机制至今未明,大多数学者认为与胎盘滋养细胞浸入过浅有关。赖氨酸特异性去甲基化酶(Lysine(K)-specific demethylase 5C KDM5C)是一种致癌基因,可以诱导多种肿瘤细胞的增殖和转移。骨转化蛋白-7(Bone morphogenetic protein-7 BMP7)属于转化生长因子超家族的一员,主要调节成骨的形成和发育。骨转移蛋白受体II(Bone morphogenetic protein receptor II BMPRII)是能与BMP7特异性结合的受体。有学者研究发现在肝癌细胞中KDM5C可以通过抑制BMP7的表达从而导致肝癌细胞的远处增殖和转移,而肿瘤细胞与胎盘滋养细胞的生物学行为相似,浸润程度不同,KDM5C-BMP7信号通路是否参与了重度子痫前期的发病尚未见报道。目的本次研究通过检测胎盘组织中KDM5C,BMP7及其BMPRII的表达,初步探讨KDM5C-BMP7信号通路是否参与了重度子痫前期的发生。材料及方法1研究对象根据人民卫生出版社出版的第八版《妇产科学》诊断标准,选取2014年9月-2016年1月在郑州大学第三附属医院产科住院的临床诊断为早发型重度子痫前期、晚发型重度子痫前期患者的胎盘组织各30例为病例组,同期选取麻醉方式为硬膜外阻滞下麻醉的剖宫产分娩的正常相应孕周产妇的胎盘组织30例为正常对照组,经患者及家属知情同意并经伦理委员会批准,纳入的研究对象均为单胎妊娠,且排除慢性高血压、糖尿病、心脏病、免疫系统疾病、多囊卵巢综合征等合并症。2方法在无菌操作下分别在胎盘娩出后15分钟内采集标本,注意避开钙化、坏死区,分别在胎盘母体面中间位置及四周位置取5块全层组织,大小约2cm×2cm×1cm,生理盐水冲洗组织块上的血液,一部分放入甲醛中用于免疫组化研究,剩余部分封存于无菌冻存管中,立即放入液氮罐,然后转移至-80℃冰箱中保存备用,后期用于提取RNA和蛋白。应用免疫组化方法检测三组胎盘组织中KDM5C、BMP7及BMPRII的蛋白定位;实时荧光定量PCR,Western blot技术检测三组胎盘组织中KDM5C、BMP7及BMPRII的m RNA及蛋白的相对表达量有无差异,初步探讨KDM5C-BMP7信号通路在重度子痫前期发病中的作用。3统计学处理采用SPSS 21.0统计软件进行统计学处理。定量数据资料结果用(x|-)±s表示。定性数据资料比较采用X2检验。符合正态分布、方差齐的多个独立样本均数比较应用单因素方差分析,多组间多重比较应用最小显著差(LSD)法,不符合正态分布或方差齐的用非参数检验。以α=0.05为检验水准。结果1三组孕产妇一般临床资料的比较1.1无统计学差异的临床数据三组产妇的年龄、孕时体重指数(BMI)、孕期增加体重、空腹血糖、妊娠次数相比,差异均无统计学意义(P0.05)。1.2有统计学差异的临床数据三组产妇分娩时的妊娠天数(天)、收缩压、舒张压、新生儿出生体重、出生1分钟、5分钟阿氏评分相对比,早发型重度子痫前期组的分娩孕周小于晚发型重度子痫前期组,晚发型重度子痫前期的分娩孕周又小于正常组;早发型重度子痫前期组的血压较晚发型重度子痫前期组明显增高,新生儿出生体重及出生后阿氏评分在早发型重度子痫前期组均显著降低,三组相比差异均有统计学意义。这表明孕周越小,母婴的并发症和合并症越严重,预后越差(P0.05)。2三组胎盘组织中KDM5C、BMP7及BMPRII m RNA的表达2.1三组胎盘组织中KDM5C m RNA的表达三组胎盘组织中均可检测到KDM5C m RNA的表达,正常组KDM5C m RNA的相对表达量为2.19±0.34,晚发型重度子痫前期组为1.05±0.81,早发型重度子痫前期组为0.82±0.86,三组相比差异有统计学意义(P0.05)。2.2三组胎盘组织中BMP7 m RNA的表达三组胎盘组织中均可检测到BMP7 m RNA的表达,正常组BMP7 m RNA的相对表达量为0.54±0.25,晚发型重度子痫前期组的相对表达量为0.82±0.12,早发型重度子痫前期组的相对表达量为1.35±0.22,三组相比差异有统计学意义(P0.05)。2.3三组胎盘组织BMPRII m RNA的表达三组胎盘组织中均可检测到BMPRII m RNA的表达,正常组BMPRII m RNA的相对表达量为0.39±0.10,晚发型重度子痫前期组的相对表达量为0.55±0.11,早发型组的相对表达量为1.02±0.13,三组相比差异有统计学意义(P0.05)。3三组胎盘组织中KDM5C,BMP-7及BMPRII蛋白的表达定位三组胎盘组织中均可检测到KDM5C、BMP7及BMPRII蛋白的表达,KDM5C蛋白主要表达于胎盘合体滋养细胞和绒毛外滋养细胞的细胞核及血管内皮细胞上,在晚发型重度子痫前期组的阳性表达率小于正常组,早发型重度子痫前期组组的阳性表达率又小于晚发型重度子痫前期组,三组相比差异有统计学意义(P0.05);BMP7蛋白主要表达于胎盘合体滋养细胞和绒毛外滋养细胞的细胞质上,BMPRII蛋白主要表达于胎盘合体滋养细胞和绒毛外滋养细胞的细胞膜上,与正常对照组相比,BMP7及BMPRII蛋白在晚发型重度子痫前期组的阳性表达率升高,而早发型重度子痫前期组又高于重度子痫前期早发型组,三组相比差异均有统计学意义(P0.05)。4三组胎盘组织中KDM5C,BMP-7及BMPRII蛋白的表达变化4.1三组胎盘组织中KDM5C蛋白的相对表达量Western blot结果显示:KDM5C蛋白的相对表达量在正常组、晚发型重度子痫前期组、早发型重度子痫前期组分别为0.32±0.45、0.21±0.35、0.11±0.05,三组胎盘组织中KDM5C蛋白的相对表达量相比差异有统计学意义(P0.05)。4.2三组胎盘组织中BMP7蛋白的相对表达量BMP7蛋白的相对表达量在正常组、早发型重度子痫前期组、晚发型重度子痫前期组分别为0.05±0.07、0.08±0.09、0.11±0.25,三组胎盘组织中BMP7蛋白的相对表达量相比差异有统计学意义(P0.05)。4.3三组胎盘组织BMPRII蛋白的相对表达量BMPRII蛋白的相对表达量在正常组、早发型重度子痫前期组、晚发型重度子痫前期组分别为0.03±0.02、0.08±0.19、0.16±0.15,三组胎盘组织中KDM5C蛋白的相对表达量相比差异有统计学意义(P0.05)。结论在重度子痫前期胎盘组织中,KDM5C、BMP7和BMPRII的异常表达有可能参与了重度子痫前期的发生,且此作用在早发型重度子痫前期中表现的更加明显。这有利于我们进一步认识并了解重度子痫前期的发病原因,为寻找新的分子标记物提供理论依据。
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【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R714.244

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