雷公藤内酯醇对恶性胸腔积液的抑制作用及机制研究

发布时间：2019-04-18 08:33

【摘要】：背景与目的：非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer, NSCLC)是临床上最常见、恶性程度最高的肿瘤之一,位居全球恶性肿瘤死因的首位。恶性胸腔积液(Malignant pleural effusion, MPE)是NSCLC患者预后不良的重要原因。目前,虽然临床上针对MPE的治疗方法很多,但是总体来说至目前为止治疗效果仍不尽如人意。血管内皮生长因子A (Vascular endothelial growth factor-A, VEGF-A)在恶性胸腔积液的发生发展过程中发挥着重要的作用。VEGF-A与VEGF受体结合后可以通过一系列机制刺激血管内皮细胞增殖、迁徙,并增强毛细血管通透性,进而促进了MPE的产生及发展。因此,科研工作者们致力于寻找新的药物抑制VEGF-A进而抑制MPE的形成。雷公藤内酯醇(Triptolide,TL)是从卫矛科植物雷公藤中分离出的活性最高的环氧化二萜内酯化合物。大量研究证实雷公藤内酯醇具有抗炎、抗肿瘤、抗血管生成和抗生育等作用。作为从中药中提取的化学活性单体,雷公藤内酯醇价格低廉,毒副反应小,病人耐受性好,现已经应用于临床用于治疗系统性红斑狼疮、肾炎、风湿性关节炎、类风湿性关节炎等多种自身免疫和炎性疾病。近期有研究发现,雷公藤内酯醇可以抑制肿瘤VEGF-A表达,并且抑制血管的生成。综上所述,本研究拟通过体内外实验观察雷公藤内酯醇对LLC细胞功能的影响及其对裸鼠恶性胸腔积液的治疗作用,并探讨其可能机制。方法：(1)不同浓度TL处理Lewis肺癌(Lewis lung cancer,LLC)细胞后,应用噻唑蓝(MTT)及台盼蓝染色法检测TL对LLC细胞增殖、存活的影响。(2)分别用0、50、100.200nmol/ml的TL作用于LLC细胞24小时(h),然后用Western blotting法检测细胞中VEGF-A的蛋白表达水平。(3)取对数生长期的LLC细胞株,建立恶性胸腔积液裸鼠模型。随机将裸鼠分为2组,于建模后第3天开始,治疗组给予右侧胸腔注射0.4mg/kg的TL,对照组右侧胸腔内注射50μl含0.01% DMSO的生理盐水。隔日一次。接种肿瘤细胞后的第14天,给予裸鼠行胸部CT检查,观察胸腔积液的形成情况。第20天用水合氯醛过量麻醉处死裸鼠,用lml注射器抽吸裸鼠胸腔积液,计算两组裸鼠胸水的平均体积；胸水离心后,收集上清行ELISA法检测胸腔积液中VEGF-A表达水平；收集离心后的胸水沉渣涂片,行改良Giemsa法染色。解剖裸鼠,暴露胸腔,计数肿瘤结节数量,收集肿瘤结节称重。石蜡包埋肿瘤结节切片行HE染色及免疫组化检查,观察微血管密度及VEGF-A的表达差异。结果：(1)TL抑制LLC细胞增殖,并且呈浓度和时间依赖性,IC50=64.741nmol/ml。 (2) Western blotting结果提示TL抑制LLC细胞中VEGF-A的蛋白表达水平,随着TL浓度提高,VEGF-A表达逐渐减少。(3)胸部CT检查结果提示裸鼠胸腔内有积液形成。处死裸鼠后可抽吸到血性不凝固的胸腔积液,TL治疗组胸水平均体积为230.83±46.05l,对照组胸水平均体积为350.33±62.35μl,差异有统计学意义。打开裸鼠胸腔可以看到肿瘤结节遍及脏、壁层胸膜,TL治疗组和对照组平均肿瘤结节数目分别为12.50±2.26、19.17±2.32,P0.01。胸腔积液上清ELISA检查结果发现,VEGF-A在TL治疗组表达减少(308.50±49.89 ng/ml VS 430.67±34.58 ng/mlP0.001)。肿瘤组织免疫组化检查发现VEGF-A在两组中的表达分别为2.50±1.05、4.83±2.32,差异有统计学意义(P0.01),微血管密度(Micro vesse density, MVD)从13.17±2.71减少到8.83±2.04 (P0.05)。结论：(1)TL可显著抑制LLC细胞增殖,减少细胞VEGF-A表达；(2)TL可以抑制MPE的发生发展,有望成为治疗MPE的有效药物；(3)TL可能是通过下调VEGF-A表达,抑制肿瘤新生血管生成的机制发挥抑制恶性胸腔积液的作用。
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【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R96

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