半夏泻心汤对糖尿病大鼠Cajal间质细胞、肠神经系统及CBS的影响

发布时间：2019-08-09 09:10

【摘要】：目的探讨半夏泻心汤对糖尿病(diabetes mellitus, DM)大鼠Cajal间质细胞(interstitialcells of Cajal, ICC)、肠神经系统（Enteric nervous system，ENS）以及胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase, CBS)的影响及其可能的作用机制。方法 1.糖尿病大鼠模型诱导将60只健康雄性SD大鼠设为正常对照组、糖尿病模型组（DM模型组）、半夏泻心汤组（中药组）和多潘立酮组（西药组）。除正常对照组外，所有大鼠行一次性腹腔注射(ip)链脲佐菌素(STZ，55mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型。所有糖尿病大鼠饲养6周后再选取成功模型。 2.干预方法中药组每天给予半夏泻心汤[5.4g/(kg.d)]灌胃，西药组每天给予多潘立酮[5mg/(kg.d)]灌胃，DM模型组及正常对照组每天给予等量生理盐水，每天1次，持续灌胃8周。 3.一般情况诱导糖尿病模型成功后观察大鼠的饮食、饮水、粪便、毛色及精神状况，每周测体重、检测鼠尾末端血糖。 4.胃残留率、小肠推进率测定干预8周后禁食12小时，予预先调制的黑色半固体营养糊(1mL/100g)灌胃。30分钟后注射10％水合氯醛麻醉开腹，快速结扎幽门和贲门后取出胃，结扎幽门和回盲部，无张力下分离肠系膜。胃残留率（%）=(胃总重-胃净重)／糊重×100％。测量从幽门至回盲部的总长度作为小肠总长度，从幽门至营养糊黑染所在的距离作为小肠推进长度。小肠推进率（%）=营养糊推进距离(cm)／小肠全长(cm)×100％。 5.免疫组化SP法检测胃窦组织c-kit、SCF；空肠组织c-kit、SCF、SYP、PGP9.5、SP、CBS表达的变化将四组实验大鼠胃窦、空肠组织标本的石蜡切片通过免疫组化SP法、图像分析观察胃窦ICC及肠神经丛、CBS阳性细胞表达的分布及变化。 6.Western blot检测空肠组织c-kit、SCF、CBS蛋白的表达分别将四组实验大鼠空肠组织标本提取蛋白后行免疫印迹检测，通过灰度值对比检测蛋白表达的变化情况。结果 1.一般情况与正常对照组比较，DM模型组体重减轻，血糖及胃残留率升高、小肠推进率下降，与DM模型组比较，两个用药组多饮、多食及多尿症状减轻，精神状态好转，体重明显增加(P0.05)，胃残留率降低(P0.05)，小肠推进率增加(P0.05)，，中药组血糖降低较DM模型组降低(P0.05)。 2.各组大鼠胃窦与空肠组织c-kit与SCF的免疫组化结果与正常对照组比较，DM模型组大鼠胃窦、空肠c-kit及SCF平均光密度值显著降低(P0.05)，与模型组比较，两个用药组胃窦及空肠c-kit及SCF平均光密度值明显增加(P0.05)，且中药组胃窦c-kit平均光密度高于西药组(P0.05)。 3.各组大鼠空肠组织CBS的免疫组化结果与正常对照组相比，糖尿病大鼠空肠CBS光密度值升高(P0.05)，两个用药组较DM模型组CBS光密度值降低(P0.05)。中药组与西药组之间CBS光密度值无统计学差异(P＞0.05)。 4.各组大鼠空肠组织SYP、PGP9.5、SP的免疫组化结果DM模型组SYP、PGP9.5、SP平均阳性产物面积和吸光度值较正常对照组明显减少(P0.05),中药组、西药组SYP、PGP9.5、SP阳性产物面积和平均吸光度值较DM模型组显著增加(P0.05),但仍低于正常对照组(P0.05)。 5.各组大鼠空肠Western Blot法测定c-kit、SCF蛋白、CBS蛋白的表达结果中药组与西药组的c-kit蛋白及SCF蛋白的表达明显高于DM模型组（P0.05），但低于正常对照组（P0.05）；中药组与西药组之间c-kit蛋白及SCF蛋白表达无明显差异（P0.05）。DM模型组CBS蛋白的表达较正常对照组大鼠明显上升（P0.05）,两用药组CBS蛋白表达较DM模型组降低，较正常对照组CBS蛋白表达增高（P0.05）。结论 1.糖尿病大鼠存在胃排空延迟和肠推进速率下降。 2.半夏泻心汤促进糖尿病大鼠c-kit及SCF表达，降低CBS的表达，提示对受损的胃窦ICC及气体递质H2S有一定程度逆转的作用，从而在一定程度上改善糖尿病大鼠的胃动力障碍。 3.半夏泻心汤促进糖尿病大鼠空肠肌间神经丛SYP、PGP9.5和SP的表达，提示对受损的糖尿病大鼠小肠肌间神经丛有一定程度的修复作用。 4.糖尿病大鼠空肠CBS的表达异常，提示H2S的合成异常可能是肠道动力障碍的原因之一。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R285.5;R259

【参考文献】