参松养心胶囊对糖尿病大鼠心肌Cx40的影响

发布时间：2019-10-17 00:42

【摘要】：目的:糖尿病是威胁人类健康主要疾病之一。据统计糖尿病患者中心血管并发症所导致的死亡率75%,其中大多数是死于糖尿病相关的冠心病。临床上糖尿病患者可出现各种类型心律失常,但其发病机制目前仍未完全明确。同时临床上也缺乏有效的治疗手段,主要是抗心律失常药物及导管消融,对于缓慢性心律失常通过植入永久起搏器治疗,对于VT/VF还可植入ICD。虽然这些治疗措施积极有效,但同时也有其局限性。近年来,人们提出的针对心肌离子电流紊乱、折返环形成及异位兴奋点等的病理生理学上游治疗的概念。缝隙连接(gap junction,GJ)是心肌细胞间特殊的连接方式,常见于心肌间闰盘处。GJ中的连接蛋白(connexin,Cx)在细胞偶联中发挥着重要的作用。心肌的连接蛋白主要有Cx40、Cx43及Cx45三种。已有研究证实Cx40主要分布于心房肌及心室肌中,Cx43则主要分布于心室肌,在心房肌中仅有低水平表达,Cx45分布于心脏的传导系统中。在电传导方面,Cx40及Cx43具有快速传导的特点,而Cx45的传导速率相比而言却要慢很多,可能是在心电传导中起到调控作用。糖尿病所致的心律失常发生与心肌组织的被动电特性及传导性有关,而细胞-细胞之间的传导性正是由位于闰盘的缝隙连接(GJ)所决定。研究证实RAAS的过度激活、氧化应激、心肌纤维化等可是导致糖尿病心肌Cx表达与分布异常的原因。本研究通过分析糖尿病大鼠心肌Cx40表达与分布的改变,探讨参松养心胶囊及贝那普利对糖尿病大鼠心肌Cx40的影响。方法:对购自南京青龙山动物饲养中心的雄性SD大鼠50只进行随机分组,空白对照组10只,模型组40只。适应性饲养一周后,模型组予以一次性腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,SZT)65mg/kg,3天后测尾静脉血糖,血糖≥16.7mmol/l为造模成功。最终糖尿病大鼠成模37只,模型组再随机分为糖尿病对照组12只,贝那普利组12只及参松养心胶囊组13只。贝那普利组予以每日贝那普利7.5mg/kg灌胃,参松养心胶囊组予以每日参松养心胶囊1g/kg灌胃,空白对照组及糖尿病组每日予以等量蒸馏水灌胃。各组予以充足食物及水饲养8周后,予以25%乌拉坦6ml/kg腹腔注射,麻醉后行心电图检查。断头猝死,暴露心脏,取心脏,置于4℃生理盐水中洗涤。沿心脏长轴切开,再沿房室沟切开,分别取出左房及左室。标本分成两部分,其中一份浸入福尔马林组织固定液中浸泡一周,另一部分放置-80℃超低温冰箱中保存。采用westernbloting技术分别对各组心室肌及心房肌cx40表达水平进行分析。采用he染色技术观察各组大鼠心肌结构改变并采用免疫荧光技术对心肌cx40分布情况进行分析。结果:1、饲养8周后,糖尿病大鼠出现明显的三多一少症状,心电图显示糖尿病组大鼠出现各种类型心律失常,糖尿病大鼠组心率较其他三组明显下降(p0.05),糖尿病组p波宽度增宽,与正常对照组及贝那普利组差异有统计学意义(p0.05),但与参松养心胶囊组相比差异无统计学意义。四组间qrs时间、qtc比较差异无统计学意义。2、糖尿病组大鼠心房肌及心室肌cx40水平较正常对照组下降(p0.05),贝那普利组心房肌及心室肌cx40表达水平较糖尿病组有升高趋势(p0.05),参松养心胶囊组心房肌cx40表达水平较糖尿病组有升高趋势,但心室肌cx40表达水平较糖尿病组差异无统计学意义(p0.05)3、he染色显示正常对照组大鼠心肌细胞排列整齐,糖尿病组大鼠出现大片的心肌细胞坏死凋亡,排列紊乱,细胞间多见脂肪组织及纤维组织,贝那普利组及参松养心胶囊组大鼠心肌细胞排列整齐,但仍可见到纤维组织及血管炎性反应。3、免疫染色显示,正常对照组心肌cx40表达分布于心肌细胞长轴的端端,呈阶梯状分布,偶可见于细胞侧面分布。糖尿病组大鼠心肌cx40表达多数分布于心肌细胞的侧面,分布紊乱,贝那普利组大鼠心肌cx40表达分布呈现端端分布及侧面化分布并存的现象,参松养心胶囊组心房肌cx40表达水平增高,但分布仍呈现为侧面化分布为主。结论:1、糖尿病大鼠可出现各种类型心律失常及hr下降等。贝那普利及参松养心胶囊均对hr有提高作用。贝那普利对p波宽度有改善作用,但对qrs时间及qtc影响有限,参松养心胶囊对p波宽度、qrs及qtc影响有限。2、cx40主要分布与心房肌中,在心室肌中分布较少。糖尿病大鼠心肌出现Cx40表达的下降及分布呈侧面化表现。3、贝那普利对糖尿病大鼠心肌Cx40的表达及分布均有一定的改善作用,参松养心胶囊对糖尿病大鼠心房肌Cx40的表达有一定的上调作用,但对其空间分布影响较小;参松养心胶囊对糖尿病大鼠心室肌Cx40的表达及分布无明显改善作用
【图文】：

柱状图,心室肌,心房肌,大鼠

皖南医学院硕士学位论文Connexin40 的表达[10]。我们实验中通过 Western blotting 技术比较心房与心室肌Connexin40 的表达，，及免疫荧光技术分析 Cx40 分布再次验证 Cx40 在心房及心室中分布的差异。结果表明，Connexin40 在心房中表达远高于心室，且这种差异也同样存在于糖尿病组、贝那普利组及参松养心胶囊组大鼠心肌中。4.1 大鼠心室肌及心房肌 Cx40 表达差异 Western blotting 图及免疫荧光图（图 2）图 2 正常组大鼠心室肌及心房肌 Cx40 表达差异

心肌细胞,血管炎,排列规则,性反应

25注: 图 3 中 A（正常对照组）：心肌细胞排列规则、紧密；B（糖尿病组）心肌排列紊乱，可见心肌间大量的脂肪浸润，大片的无核淡染区及血管炎性反应；C（贝那普利组）心肌细胞排列规则，但组织较疏松；D（参松养心胶囊组）可见心肌细胞排列欠规则，少许无核淡染区及少许血管炎性反应。
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】