重组灵芝免疫调节蛋白抗衰老与美白作用实验研究

发布时间：2019-11-12 21:46

【摘要】：目的:研究重组灵芝免疫调节蛋白对D-半乳糖诱导的衰老小鼠的抗衰老及其美白作用。方法:(1)重组灵芝免疫调节蛋白抗衰老作用实验研究?体内实验除正常对照组外,其余4组全部采用D-半乳糖诱导小鼠的衰老模型。将健康昆明小鼠随机分为5组:正常对照组、模型对照组、rLZ-8低、中、高剂量组(剂量由低到高分别为660,990及1320ug/kg体重)。连续给予受试药物(小鼠背部去毛后涂抹给药)8周后,麻醉取血与皮肤组织,用于血清学与组织形态学等指标检测。?体外实验体外培养人皮肤成纤维细胞,将细胞分为4组:正常对照组、rLZ-8低、中、高剂量组(0.5,1及2ug/ml),分别于24h,48h,72h收集6孔板中细胞培养上清以检测胶原、HA及HYP含量。(2)重组灵芝免疫调节蛋白美白作用实验研究体外培养黑色素瘤细胞,均匀接种于6孔培养板中,细胞接种24h后,吸去培养液,加入无血清培养液。次日,加入受试药物rLZ-8使终浓度为8,16,24,32,48ug/ml,并分别于24h,36h,48h及60h后收集细胞及培养上清,检测TYR与LDH活性。同时采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定黑色素瘤细胞增殖抑制率。结果:(1)涂抹给药后,小鼠较造模后毛色变亮,行动较为敏捷,外观方面出现一定程度改观。(2)给予受试药物后,各给药组小鼠皮肤含水量均有不同程度提高。(3)HE染色结果显示,rLZ-8各剂量组小鼠皮肤表皮增厚,真皮层纤维增多增粗、皮肤附属器数目亦有所增加。(4)免疫组织化学染色结果显示,各剂量组I型、III型胶原蛋白、波形蛋白含量均有提高。(5)血清学与皮肤组织匀浆结果显示,各给药组与模型对照组相比,超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、羟脯氨酸(Hydroxyproline,HYP)、褪黑素(Melatonin,MT)均有明显上调(P0.05),丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量降低(P0.05)。(6)体外实验结果显示,与空白对照组相比,各给药组人皮肤成纤维细胞I型、III型胶原蛋白、透明质酸(Hyaluronic acid,HA)及HYP水平均有上调(P0.05)。(7)rLZ-8可抑制黑色素瘤细胞增殖速率,同时降低酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)、乳酸脱氢酶(Lactic dehydrogenase,LDH)活性。结论:1.rLZ-8可有效改善衰老小鼠的外观特征及皮肤组织的病理形态,提高皮肤组织中I型、III型胶原蛋白、波形蛋白含量,上调成纤维细胞分泌I型、III型胶原蛋白、HYP及HA,体内体外实验共同证实重组灵芝免疫调节蛋白具有抗衰老作用。2.rLZ-8可提高抗氧化物酶(SOD、CAT及GSH-Px)活性、上调HYP、MT水平,下调脂质过氧化产物MDA水平,增强衰老小鼠机体抗氧化能力,发挥其延缓机体衰老的作用。3.rLZ-8可以抑制黑色素瘤细胞增殖降低黑色素合成过程中限速酶TYR的活性,破坏黑色素瘤细胞,以达到美白肌肤的作用。
【图文】：

造模前后小鼠外观变化图

厚度有所增加，胶原纤维较模型对照组明显增多增粗且分布趋于均匀，皮肤器形态有较好改善，数目亦有所增加；其中中、高剂量组较低剂量组皮肤改为明显。各剂量给药组的同体实验侧小鼠皮肤较模型对照组亦有一定改善作但远不及各实验组明显。HE 染色结果见图 2.3。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285

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本文编号：2559959