齐墩果酸改善高果糖所致大鼠脂肪肝的作用及机制的研究

发布时间：2020-02-02 02:13

【摘要】：目的：探讨齐墩果酸（Oleanolic acid, OA）对果糖所致大鼠脂肪肝的作用效果并阐明其可能的作用机制。方法：将24只SPF级雄性SD大鼠（体重210~230g）适应性饲养7天后，按照体重大小随机分为4组（n=6）：（1）正常对照组（controlgroup, CON）：自由饮食，正常饮水；（2）果糖对照组（fructose controlgroup, FRU）：自由饮食，饮用10%果糖水(w/v,每天配制)；（3）果糖齐墩果酸低剂量组（fructose-OA-low-dose group, FOL）：自由饮食，饮用果糖水， OA5mg/kg；（4）果糖齐墩果酸高剂量组（fructose-OA-high-dose group，FOH）：自由饮食、饮用果糖水，OA25mg/kg。每三天记录一次体重，并根据体重变化调整用药组大鼠给药量。用药组起始果糖水浓度均为10%，每天记录饮用果糖水量，并对果糖水浓度作相应调整，使用药组大鼠果糖摄入量与FRU组一致。各组大鼠饲养10周末，夜间禁食14h后，隔日称体重，乙醚麻醉下摘除眼球取血，分离血浆检测TG、TC、NEFA、GLU、INSULIN浓度；处死大鼠，取肝脏，同时对附睾脂肪（epididymal adipose）和肾周脂肪（peri-renal adipose）称重，行肝脏HE染色和油红O染色，同时检测肝脏TG、TC含量；提取肝组织总RNA，逆转录mRNA获得cDNA，，用Real-Time PCR方法检测肝脏脂质合成转录因子SREBP-1c、ChREBP及其下游相关基因FAS、ACC-1、SCD-1、LPK、MTTP和脂质氧化相关基因PPARα、CPT1a、ACO及PPARγ、CD36、G6Pase的mRNA水平；提取肝细胞核蛋白，用Western blot方法检测调节脂质合成的两个关键转录因子SREBP-1c和ChREBP的蛋白表达量。实验数据应用StatView统计软件进行分析，以均数±标准误（x±SEM）表示，t检验进行两组数据的差异比较。结果： 1.相对于CON组，FRU组、FOL组、FOH组的能量摄入量要显著高于CON组，且差异有统计学意义（P0.05）； 2.相对于CON组，饮用果糖水的FRU组、FOL组、FOH组大鼠内脏脂肪量，即附睾脂肪和肾周脂肪重量（e+p WAT）增加明显（P0.05）；OA用药组相对FRU组大鼠e+p WAT下降趋势不明显（P0.05）；同样，相对于CON组，FRU组大鼠肝脏重量增加明显（P0.05），但用药组大鼠肝脏重量下降趋势不明显（P0.05）； 3.相对于CON组，FRU组大鼠血清生化指标TC、TG、GLU、INSULIN浓度升高明显，差异有统计学意义（P0.05）；相对FRU组，OA用药组大鼠血清GLU下降明显（P0.05），且FOL组、FOH组大鼠血清TC、TG、NEFA和INSULIN相对于FRU组都呈剂量依赖性下降，但差异没有统计学意义（P0.05）； 4.与CON组相比，FRU组大鼠肝脏TC没有明显变化，但TG增高显著（P0.05），且油红O染色结果显示，FRU组大鼠肝脏脂质沉积严重（P0.05）；相对于FRU组，OA高剂量用药组FOH大鼠肝脏TG下降明显，差异具有统计学意义（P0.05）；油红O染色结果提示，FOH组大鼠肝脏脂质沉积情况明显轻于FRU组（P0.05）； 5. Real-Time PCR实验结果显示，与CON组相比，FRU组大鼠肝脏SREBP-1c、ChREBP、FAS、ACC-1、SCD-1等脂质合成基因mRNA显著升高（P0.05）；相对于FRU组，FOH用药组大鼠肝脏SREBP-1c、ChREBP、FAS、ACC-1、SCD-1mRNA水平显著降低（P0.05）；6. Western blot实验结果表明，与CON组相比，FRU组大鼠肝脏脂质合成基因转录调节因子SREBP-1c和ChREBP蛋白表达量增高（P0.05），相对于FRU组，FOH组大鼠肝细胞核SREBP-1c蛋白表达水平显著降低（P0.05），而FOH组大鼠肝脏细胞核ChREBP蛋白表达量变化不大（P0.05）。结论： 1高果糖饮食后，大鼠脂质代谢发生紊乱，脂肪肝形成； 2齐墩果酸对果糖造成的大鼠脂肪肝有明显的改善作用； 3齐墩果酸对果糖所致大鼠脂肪肝的作用与其下调肝脏脂质合成转录因子SREBP-1c，减少其下游相关基因的mRNA表达量密切相关。
【图文】：

果糖,大鼠,体重,生化指标

28注：* p<0.05。图 1 OA 对果糖饮食后大鼠能量摄入量、体重和白色脂肪量的影响Fig.1 Effect of OA on energy intake, body weight and e+p WAT in fructose diet rats2.2 大鼠血浆脂质代谢相关生化指标的变化2.2.1 果糖水饮用 10 周后大鼠各项血浆生化指标的变化相对于 CON 组，FRU 组大鼠血清生化指标 TC、TG、GLU、INSULIN 浓明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）（图 2a-b, d-e）；而 FRU 组大鼠血清 NE相对于 CON 组显著降低（P<0.05）（图 2c）。

脂质代谢,生化指标,相关指标

2 大鼠血浆脂质代谢相关生化指标的变化xpression of rats plasma lipid metabolism related代谢相关指标的变化情况后大鼠肝脏脂质代谢相关指标的变化虽然 FRU 组大鼠肝脏重量、肝重体重比和计学意义（P>0.05）（图 3a-c）；FRU 组大差异达 3 倍左右（P<0.05）（图 3d），另外，组大鼠肝脏细胞空泡明显（图 4a-b）、脂质沉
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R285.5

【参考文献】