孕中晚期吗啡暴露对子代成年大鼠成瘾易感性影响及其伏隔核内Netrin-1和TH的表达

发布时间：2017-03-27 06:15

  本文关键词：孕中晚期吗啡暴露对子代成年大鼠成瘾易感性影响及其伏隔核内Netrin-1和TH的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:产前吗啡暴露往往会导致生理上和神经生物学的改变包括大脑重量和体重的降低、认知障碍和行为学改变。一些研究表明产前吗啡暴露可导致子代对精神类药物更加易感。妊娠12到18天暴露于镇痛剂量的吗啡会增加子代成年雄性大鼠伏隔核和杏仁核细胞核内阿片受体的密度。无论是伏隔核还是杏仁核都可通过中脑边缘多巴胺系统系统对调节药物的奖赏效应有重要的作用。因此,我们得出假说:产前吗啡暴露会导致子代鼠成瘾易感性增强。实验是通过对子代鼠进行吗啡注射或生理盐水注射来进行的。运用条件位置偏爱实验来检测子代鼠的成瘾易感性。并通过检测伏隔核内Netrin-1和TH的含量来探究其神经生物学机制。本实验的目的包括以下几项(1)建立并完善大鼠孕中晚期吗啡暴露模型;(2)研究孕中晚期吗啡暴露对子代鼠的体重及死亡率的影响;(3)研究孕中晚期晚期吗啡暴露对子代成年鼠成瘾易感性的影响;(4)检测孕中晚期吗啡暴露的子代成年子代大鼠伏隔核内神经轴突导向因子(Netrin-1)和酪氨酸羟化酶(TH)的含量,并和生理盐水暴露组作出比较;(6)检测CPP实验后子代鼠伏隔核内神经轴突导向因子(Netrin-1)和酪氨酸羟化酶(TH)的含量,并和生理盐水组作出比较。探索孕中晚期吗啡暴露导致子代鼠成年期成瘾易感性增加的神经化学机制。方法:将怀孕的SD大鼠随机分为吗啡暴露组(M组)和生理盐水(N组)。M组孕鼠从孕12天到18天每天9:00AM及5:00PM各两次皮下注射吗啡,吗啡的初始剂量为2mg/kg,以后每天递增1mg/kg,直至5mg/kg维持。N组怀孕大鼠于同样的时间点每天注射等容量的生理盐水。(1)称量两组子代鼠出生时的体重、4周体重、8周体重并记录出生后3天死亡率、4周死亡率、8周死亡率;(2)随机从M组和组的子代鼠中各取16只,进行条件位置偏爱实验(CPP):1)实验前三天让大鼠在CPP箱内每天自由活动两小时,以适应环境;2)第1-3天,每天让大鼠在CPP箱内自由活动15min,检测大鼠自然偏爱的一侧;3)第4-10天建立CPP和药物注射,上午注射吗啡,下午注射生理盐水[吗啡(3mg/kg,i.p.)/生理盐水(1mg/kg,i.p)];4)第11天,检测并记录大鼠用药后的位置偏爱;(3)M组N组子代鼠饲养至八周每组随机取出8只大鼠,麻醉后断头取其伏隔核组织;(4)两组子代鼠经CPP检测后分为两组,即孕中晚期吗啡暴露组子代大鼠(CPPM组),一组为孕中晚期生理盐水暴露组子代大鼠(CPPN组)。每组随机取出8只大鼠,麻醉后断头取其伏隔核组织;(5)Western-blot法检测各组子代大鼠伏隔核内Netrin-1和TH的含量(6)免疫荧光法检测各组子代大鼠伏隔核内Netrin-1和TH的含量。结果:(1)子代鼠出生体重M组小于N组(P0.01),M组子代雌雄鼠出生4周及8周体重均小于N组(P0.01)。子代鼠出生3天、4周、8周死亡率M组均明显高于N组(P0.01)。(2)经过连续注射7天的吗啡后,M组子代鼠在伴药侧停留时间明显延长(P0.01),而N组子代鼠在伴药侧停留时间明显延长(P0.05)。(3)M组子代鼠伏隔核内Netrin-1及TH的含量高于N组(P0.05)。(4)CPPM组子代鼠伏隔核内Netrin-1及TH的含量高于CPPN组(P0.05)。结论:(1)孕中晚期吗啡暴露会导致不同年龄段子代鼠体重减轻而且会增加子代鼠生长发育过程中各个时期的的死亡率。(2)孕中晚期吗啡暴露可增加子代鼠的成瘾易感性。(3)孕中晚期吗啡暴露导致子代鼠成年期成瘾易感性增加可能与其伏隔核内Netrin-1和TH含量增加有关。
【关键词】：吗啡暴露 子代 体重 死亡率 Netrin-1 TH CPP
【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R614
【目录】：

• 英文缩略词5-8
• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 前言13-18
• 材料与方法18-27
• 1. 研究材料18-21
• 1.1 实验动物18-19
• 1.2 主要实验药物试剂19-20
• 1.3 主要仪器20-21
• 2. 实验方法21-26
• 2.1 孕中晚期吗啡暴露对子代鼠体重及死亡率影响21
• 2.1.1 孕中晚期吗啡暴露模型建立21
• 2.1.2 测量子代鼠体重并计算死亡率21
• 2.2 条件位置偏爱实验21-22
• 2.2.1 实验装置21-22
• 2.2.2 实验过程22
• 2.3 Western-blot法检测子代成年鼠伏隔核内Netrin-1 及TH表达22-24
• 2.3.1 实验过程22-23
• 2.3.2 提取蛋白23
• 2.3.3 Western操作流程23-24
• 2.4 免疫荧光法检测子代成年鼠伏隔核内Netrin-1 及TH表达24-26
• 2.4.1 制作伏隔核标本24-25
• 2.4.2 免疫荧光步骤25-26
• 3 统计方法26-27
• 结果27-38
• 1 孕中晚期吗啡暴露对子代鼠体重及死亡率的影响27-28
• 2 孕中晚期吗啡暴露对子代成年大鼠CPP实验的影响28-30
• 3 孕中晚期吗啡暴露子代鼠成年期伏隔核内Netrin-1 和TH表达30-38
• 3.1Western-blot结果30-34
• 3.2 免疫荧光结果34-38
• 讨论38-45
• 结论45-46
• 参考文献46-55
• 综述55-67
• 参考文献62-67
• 作者简介及读研期间主要科研成果67-68
• 感谢68

  本文关键词：孕中晚期吗啡暴露对子代成年大鼠成瘾易感性影响及其伏隔核内Netrin-1和TH的表达，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：269996