尿皮素Ⅱ对大鼠PVN小细胞分泌神经元谷氨酸能突触传递的影响

发布时间：2020-07-04 03:14

【摘要】：[目的]利用急性脑片全细胞膜片钳记录、神经药理学和组织化学染色技术,研究尿皮素Ⅱ(UCN Ⅱ)对大鼠下丘脑室旁核(PVN)小细胞分泌神经元的自发性放电活动和谷氨酸能突触传递的影响机制。[方法]实验动物选用出生后14-21天(P14-P21)的Wistar系雄性大鼠,用异氟烷吸入麻醉后,迅速断头取脑,然后用振动切片机来制备含PVN的下丘脑切片,切片厚度为250微米。在24-25摄氏度条件下,将下丘脑切片置于冲95%02和5%CO2混合气体的人工脑脊液(ACSF)中孵育60分钟以上。ACSF有以下组分(毫摩尔):NaCl(118),KCl(3),MgCl2.6H2O(1),NaH2P04.2H20(1),NaHCO3(25),D-Glucose(10),CaCll2(2)。PH值在 7.25-7.35 之间,渗透压为295-300mOsM。记录电极内含10微升的电极内液,其组分如下(毫摩尔):120 Potassium Gluconate,10 HEPES,1 EGTA,5 KCl,3.5 MgCl2,4 NaCl,8 biocytin,4Na2ATPan 0.2 Xa2GTP。加KOH将pH值调到7.3。电极的阻抗为5-7兆欧。通过膜片钳放大器(Axopatch-700B)及数据采集软件记录PVN神经元细胞自发性放电活动;通过微量泵将UCNⅡ注射到记录神经元周围300-500微米处,以活化记录神经元的传入纤维;在记录自发性和电刺激诱发的兴奋性突触后电流时,ACSF中加入GABAA受体阻断剂Picrotoxin,以阻断GABA能突触传递;电生理实验数据分析采用Clampf it 10.4软件.各组数据均用Mean 士 SEM表示,n代表样本数.数据统计学分析采用SPSS软件,均数的比较采用配对T检验分析,P0.05被认为有显著性差异.[结果](1)在电流钳下,PVN的小细胞分泌神经元对注入去极化电流敏感,但不表现出明显的内向整流电流和超极化活化的内向(Ih)电流。(2)局部微量注射UCN Ⅱ(100 nM)可导致51.6%的PVN小细胞型分泌神经细胞的放电频率显著升高,冲洗20分钟以后恢复到给药前水平。(3)UCNⅡ对自发性放电频率的作用随着给药浓度的升高而加强,具有明显的浓度依存性,半数有效剂量为143.3 nM。(4)局部注射给予UCN引起的部分PVN小细胞神经细胞的发电频率升高和膜去极化作用可以被非选择性的离子型谷氨酸受体的阻断剂(kynurenin acid,KYC)所阻断。(5)在GABAA受体阻断剂Picrotoxin存在下,UCN显著增加自发性兴奋性突触后电流的发生频率,增强其振幅幅度。(6)此外,UCN Ⅱ可显著增加双电刺激诱发的第一个兴奋性突触后电流的振幅(P1),明显降低了 P2/P1的比率。[结论]UCN Ⅱ通过增强兴奋性谷氨酸能突触传入来增强下丘脑PVN小细胞分泌神经元的兴奋性,增加其自发性放电的频率,提示UCN通过间接方式调节PVN小细胞分泌神经元的活动。
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R338

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