NLRP3炎症小体在休克肠淋巴液介导急性肺损伤中的作用

发布时间：2017-03-30 21:12

  本文关键词：NLRP3炎症小体在休克肠淋巴液介导急性肺损伤中的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：肺是重症休克后最易受累和最先出现症状的靶器官,失控的全身炎症反应是引起急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的关键环节。众多研究发现,失血性休克后的肠淋巴液回流是引起ALI的重要机制之一,其作用机制与炎症反应密切相关。炎症小体(inflammasome)是胞浆内由多蛋白组成的复合体,是炎症反应的核心;NLRP(Nod-like receptor family,pyrin domain containing)3炎症小体能被各种类型的分子、细菌或病毒所激活,在炎症、代谢等多种疾病的发展中发挥重要作用,是目前研究最多的一种炎症小体,在多种原因导致ALI的发病过程中均具有重要作用;最近研究表明,NLRP3炎症小体活化也是重症失血性休克引起ALI的重要机制之一。但是,休克肠淋巴液介导ALI的过程是否与NLRP3炎症小体的活化有关?减少休克肠淋巴液回流在减轻ALI的同时,是否可降低肺组织NLRP3炎症小体的表达?均有待深入研究。为此,本研究在已证实肠淋巴液引流减轻失血性休克引起的ALI的基础上,进一步采用失血性休克小鼠模型,观察肠淋巴液引流对失血性休克小鼠肺组织NLRP3炎症小体及相关信号分子表达的影响,检测休克肠淋巴液是否含有高浓度的NLRP3及炎症介质,并进一步观察静脉输入休克肠淋巴液是否可引起正常小鼠肺组织NLRP3炎症小体的高表达,从而验证NLRP3炎症小体在休克肠淋巴液介导ALI中的作用。首先,18只雄性C57BL/6J小鼠随机均分为:假手术组(Sham)、休克组(Shock)、休克+引流组(Shock+drainage)。腹腔注射戊巴比妥钠全身麻醉后,行双侧股部手术,右股动脉插管连接生物信号采集系统,连续监测平均动脉血压,左股侧动脉插管用于放血与液体复苏;腹部手术,剥离肠淋巴管,用于肠淋巴液引流。待所有手术完成、稳定30 min后,休克组、休克+引流组小鼠常规方法复制失血性休克模型。维持低血压90 min后,将放出的全血与林格氏液按1:1混匀,经右侧股动脉输液复苏,30 min完成;休克+引流组小鼠在复苏结束后,行肠淋巴液引流,至输液结束后3 h。假手术组进行相同的手术操作,但不放血、不输液。各组小鼠在相当于输液结束后3 h这一时间点,留取肺组织,观察肺组织形态学变化,检测NLRP3、TLR2、TLR4、MyD88、白介素(interleukin,IL)-1β、IL-18的表达或含量。组织形态学观察表明,假手术组小鼠肺组织结构基本正常,休克组小鼠肺组织出现了炎细胞增生、肺小叶间隔增厚等表现,休克+引流组小鼠肺组织损伤较轻。Western blotting检测显示,休克组小鼠肺组织NLRP3、TLR2、TLR4、MyD88的蛋白表达均显著高于假手术组,肠淋巴液引流降低了休克小鼠肺组织NLRP3、TLR2、MyD88的蛋白表达;ELISA检测显示,失血性休克后小鼠肺组织IL-1?、IL-18水平显著增加,肠淋巴液引流降低了IL-1?、IL-18的含量;q RT-PCR检测显示,失血性休克引起了肺组织NLRP3、TLR2、TLR4、MyD88 mRNA表达,肠淋巴液引流显著降低了这些指标的水平。随后,取正常野生型小鼠,部分小鼠在麻醉状态下,腹部手术后引流正常淋巴液1 h;部分小鼠按前述方法建立失血性休克模型、液体复苏后引流休克肠淋巴液至3 h。应用Western blotting技术检测淋巴液中NLRP3表达,应用ELISA技术检测IL-1?、IL-18含量。研究结果显示,休克肠淋巴液中NLRP3表达、IL-1?、IL-18含量未见统计学差异。上述研究表明,休克肠淋巴液引流降低了肺组织TLR2、TLR4、MyD88的蛋白或mRNA表达,从而下调NLRP3的蛋白与mRNA表达,进而降低了促炎介质IL-1β、IL-18的水平;休克肠淋巴液中NLRP3表达、IL-1?、IL-18含量未见明显变化。可见,休克肠淋巴液引起的肺组织NLRP3炎症小体活化及其介导的炎症反应是休克肠淋巴液介导急性肺损伤的重要机制之一。研究结果为以肠淋巴液为干预靶点,防治重症休克导致的ALI提供实验依据。
【关键词】：失血性休克 肠淋巴液 NLRP3 急性肺损伤 炎症反应 小鼠
【学位授予单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R459.7
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-11
• 英文缩写11-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-26
• 结果26-28
• 附图28-35
• 讨论35-38
• 结论38-39
• 参考文献39-43
• 综述NLRP3炎症小体及其在休克致器官损伤中的作用43-54
• 参考文献49-54
• 致谢54-55
• 个人简历55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 吴燕燕;王易;;Toll样受体信号通路中MyD88的研究进展[J];免疫学杂志;2012年03期

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本文编号：278095