粪肠球菌对大鼠根尖周炎Bcl-2表达影响的研究

发布时间：2020-09-15 09:38

　　目的:建立以粪肠球菌感染的大鼠根尖周炎模型,研究在大鼠根尖周病变过程中Bcl-2的表达,探讨粪肠球菌对Bcl-2表达的影响。方法:实验研究对象为雄性SD大鼠40只。采用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠,于右下颌第一磨牙牙合面开髓后,随机分为A、B两个实验组,每组各20只。A组(未封菌组):开髓后清理髓腔,封入浸有PBS缓冲液的无菌棉球;B组(封菌组):开髓后清理髓腔,封入浸有浓度为1.0×108CFU/ml的粪肠球菌菌悬液的棉球。两组均采用进口玻璃离子对开髓的牙齿进行充填以封闭髓腔。取大鼠左下第一磨牙作为正常对照。常规饲养,分别在开髓后的1、2、3、4周,各选取5只实验大鼠,乙醚麻醉,心内灌流固定,取下颌骨,修整为包含完整第一磨牙的方形骨组织块,10%EDTA脱钙,常规组织学处理(脱水、透明、浸蜡),石蜡包埋,制作平行于牙长轴矢状面5μm厚的石蜡切片。采用HE染色观察根尖区炎症组织的病理改变;使用免疫组织化学染色手段研究Bcl-2在大鼠根尖周炎症组织中的阳性表达与分布,采集图像和数据进行统计学分析。结果:1.HE染色结果HE染色结果可见,开髓1周后实验侧下颌第一磨牙根尖组织表现出不同程度的浆液性渗出及血管扩张,可见少量中性粒细胞浸润;随病变进展,炎性浸润范围扩大,其中含有大量中性粒细胞;在术后4周炎细胞灶范围仍在扩大,淋巴细胞增多。由HE病理检测结果可以说明大鼠根尖周炎动物模型建立成功。2.免疫组织化学染色结果(1)术后1至4周,A、B两组大鼠右下颌第一磨牙根尖周炎症区域均可见Bcl-2阳性细胞,主要定位于淋巴细胞和中性粒细胞的细胞浆中,部分表达在细胞核内,为棕褐色或棕黄色深染。术后1至2周,Bcl-2阳性表达增高,在2周达到高峰,之后Bcl-2的表达下降。正常对照组可见少量Bcl-2阳性细胞。(2)B组Bcl-2的阳性表达量在术后1、2、3、4周之间两两比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。A组Bcl-2的阳性表达量在术后2周和3周分别与其他时间点两两比较,差异均具有统计学意义(P0.05);术后1周和4周两个时间点上相比,差异无统计学意义(P0.05)。(3)A组术后1、2、3、4周Bcl-2的阳性表达均高于正常对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。(4)B组术后1、2、3、4周Bcl-2的阳性表达均高于正常对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。(5)在术后1、2、3、4周各时间点上,B组Bcl-2的阳性表达均高于A组,且差异有统计学意义(P0.05)。结论:1.大鼠实验性根尖周炎炎症性破坏中Bcl-2的表达量与根尖病损发展呈正相关。2.粪肠球菌对大鼠根尖周炎的病理过程产生影响,使Bcl-2阳性表达增高。
【学位单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：R781.34
【部分图文】：

根尖周炎,大鼠,灌流

图 1 大鼠根尖周炎模型的建立2.4 石蜡切片的制备2.4.1 固定于 1、2、3、4 周四个时间点，每组随机选取 5 只大鼠处死，乙醚麻醉，取仰卧位固定大鼠，触摸到胸骨柄在其稍下方打开腹腔，剥离膈肌进入胸腔，暴露心脏，用止血钳上翻固定胸骨柄，与心尖搏动处插灌流针入左心室-主动脉。用止血钳固定灌流针和心脏以防脱出。打开灌流阀灌注 9%生理盐水 300ml，同时剪开右心耳，置换出血液；待流出的液体为无色澄清，换用灌流液缓慢灌注（约 500ml），待大鼠四肢及尾巴僵硬后，停止灌流。分离灌流完成的大鼠下颌骨，与下颌中处分离两侧下颌骨，去净软组织，将其修整成约一厘米见方的小组织块，区分左右侧后放入 15ml Ep 管中，加入 4%多聚甲醛溶液于微波炉中后固定半分钟。

根尖周炎,HE染色,大鼠,计量数据

r Windows 软件进行数据处理，采用 t 检验和况。计量数据：均值±标准差(x±SD)表示。P实验结果时间点 A、B 两组 HE 染色可见, 根尖周炎虽存在但较为局限性，且累及病变范围较小性渗出及血管扩张，可见少量中性粒细胞浸润液主要以中性粒细胞为主；术后 3 周到 4 周，以淋巴细胞浸润为主。

免疫组化染色

渗出中可见 Bcl-2 阳性表达，主要定位于淋巴细胞和中性粒细胞的细胞达在细胞核内，为棕褐色或棕黄色深染。A、B 两组，1 周至 2 周，达量增加，2 周达峰，3 周开始下降，4 周持续降低。A 组中的 Bcl-2达量明显低于 B 组。正常对照组可见少量 Bcl-2 阳性表达（图 5）。

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