针刺对痉挛型脑瘫患儿肌张力影响的临床和实验研究
发布时间：2020-09-15 14:27
研究背景:脑性瘫痪(cerebral Palsy,CP)简称脑瘫,是指自受孕期间至婴幼期非进行性脑损伤和发育缺陷所致的活动受限症候群,主要表现为中枢性运动障碍和姿势异常。国际卫生组织报道脑瘫的患病率为1‰～5‰,我国报道脑瘫儿童患病率为1.2‰～2.7‰。随着早产儿及低出生体重儿存活率的上升,脑瘫儿童的发病率呈逐年上升趋势。我国目前现有脑瘫患儿400-500万,每年又新增患儿3～4万,致残率为42%～45%。脑瘫己成为我国导致儿童肢体残疾的主要疾病之一。在脑瘫的分型中以痉挛型脑瘫为常见,约占60-70%。该类型脑瘫主要为椎体系受损所致,常伴肌张力增高,后期往往并发肌腱挛缩、关节畸形并致终身残疾。因此,缓解肢体痉挛、降低肌张力是治疗痉挛型脑瘫的关键。根据导师三十多年临床实践,针刺治疗痉挛型脑瘫具有肯定的疗效,可予以推广使用。但许多西医神经内科或康复科医师对于针刺治疗痉挛型脑瘫持否定观点,认为针刺的疼痛刺激会加重痉挛、导致肢体肌张力升高,尤其是阴经取穴针刺直接刺激痉挛侧部分,更被大多数临床医师所反对。尽管目前有较多文献报道针刺可降低痉挛型脑瘫的肌张力、缓解痉挛,但其疗效评价标准主观、单一,说服力弱,不能被众多临床医师所接受和信服。因此,本课题临床部分采用随机对照试验,观察阴阳经不同经穴针刺对于痉挛型脑瘫患儿下肢肌张力的影响,通过采用改良Tardieu量表、表面肌电图仪等量化疗效指标来评估针刺降低肌张力的有效性,为临床针刺治疗痉挛型脑瘫提供确切的依据。实验部分通过行为学指标观察针刺对痉挛型脑瘫模型大鼠运动功能的影响,采用HE染色、TUNEL染色、免疫组织化学染色、westernblot等方法观察该模型大鼠皮层脑组织病理形态、神经细胞凋亡、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及cleaved-caspase3表达变化情况,进而探讨针刺改善痉挛型脑瘫运动功能、降低肌张力的内在机制,为针刺治疗痉挛型脑瘫提供实验室依据。本课题共分为两部分,摘要如下:第一部分针刺对痉挛型脑瘫患儿下肢肌张力影响的临床研究目的:本研究采用随机对照试验,观察阴阳经不同经穴针刺治疗对痉挛型脑瘫患儿下肢肌张力的影响,并在常规疗效评估方法的基础上,采用改良Tardieu量表、表面肌电图仪等量化疗效指标来评估针刺在改善痉挛型脑瘫患儿肌张力方面的应用价值,为痉挛型脑瘫患儿针刺治疗提供切实可靠的依据。方法:病例来源为2015年6月至2016年11月期间在广州中医药大学附属南海妇产儿童医院儿童康复科门诊及住院部治疗的2～6岁痉挛型脑瘫患儿,共收集符合脑瘫诊断标准及课题纳入标准的痉挛型脑瘫患儿90例,随机分为3组,分别为针刺Ⅰ组(阴经针刺组+常规康复治疗)、针刺Ⅱ组(阳经针刺+常规康复治疗)及对照组(常规康复治疗)各30例。治疗前后均行下肢改良Ashworth量表(MAS)、临床痉挛指数(CSI)、改良Tardieu量表(MTS)评估及腓肠肌表面肌电图(sEMG)检测,观察治疗前后各组患儿的下肢肌张力水平、临床痉挛程度、痉挛角度、腓肠肌肌电积分值(iEMG)参数的变化,并比较三组之间的疗效差异。结果:1.研究开始前对三组患儿的性别、胎龄、出生体重、年龄、头围、病程、肌力、分娩方式、粗大运动功能分级、粗大运动功能测试、大运动商DQ、肌张力、临床痉挛指数等方面的基线资料进行比较,三组之间无显著性差异(P0.05),说明三组具有可比性。2.在改良Ashworth肌张力评分方面,治疗后三组患儿改良Ashworth量表评级有极显著性差异(P0.01)。与对照组比较,治疗后针刺Ⅰ组、针刺Ⅱ组改良Ashworth量表评级均有极显著性改善(P0.01);治疗后针刺Ⅰ组和针刺Ⅱ组之间比较无显著性差异(P0.05)。与治疗前比较,治疗后针刺Ⅰ组、针刺Ⅱ组痉挛程度有显著性差异(P0.05),对照组无显著性差异(P0.05)。3.在痉挛指数方面,治疗后三组患儿总体均值比较有极显著性差异(P0.01)。与对照组比较,治疗后针刺Ⅰ组、针刺Ⅱ组痉挛指数均有显著性降低(P0.05);而针刺Ⅰ组和针刺Ⅱ组之间比较无显著性差异(P0.05)。与治疗前比较,三组患儿治疗后痉挛指数均有极显著性降低(P0.01)。在痉挛程度方面,治疗后三组数据比较有显著性差异(P0.05)。与对照组比较,治疗后针刺Ⅰ组痉挛程度有极显著性改善(P0.01),针刺Ⅱ组痉挛程度有显著性改善(P0.05);针刺Ⅰ组和针刺Ⅱ组之间比较无显著性差异(P0.05)。与治疗前比较,治疗后针刺Ⅰ组、针刺Ⅱ组痉挛程度有极显著性差异(P0.01),对照组无显著性差异(P0.05)。4.在内收肌痉挛角度方面,三组患儿治疗前后差值总体均值比较无显著性差异(P0.05)。在乆绳肌、踝跖屈肌群痉挛角度方面,三组数据治疗后总体均值比较有极显著性差异(P0.01),治疗前后差值总体均值比较有显著性差异(P0.05);与对照组比较,针刺Ⅰ组、针刺Ⅱ组治疗后及治疗前后差值总体均值比较有显著性增加(P0.05),针刺Ⅰ组和针刺Ⅱ组之间比较无显著性差异(P0.05)。与治疗前比较,三组患儿治疗后下肢不同部位痉挛角度总体均值有极显著性增加(P0.01)。5.在腓肠肌肌电积分值(iEMG)方面,三组患儿治疗后及治疗前后差值总体均值比较存在显著性差异(P0.05)。与对照组比较,针刺Ⅰ组、针刺Ⅱ组治疗后iEMG总体均值比较显著性降低(P0.05);与对照组比较,针刺Ⅰ组、针刺Ⅱ组治疗前后iEMG差值总体均值比较有显著性差异(P0.05);针刺Ⅰ组、针刺Ⅱ组之间比较无显著性差异(P0.05)。与治疗前比较,在右侧腓肠肌iEMG方面,三组治疗后总体均值比较均有显著性降低(P0.05),在左侧腓肠肌iEMG方面,针刺Ⅰ组和针刺Ⅱ组治疗后总体均值比较有显著性降低(P0.05),对照组无显著性差异(P0.05)。6.出生体重及胎龄与针刺Ⅰ组治疗前后腓肠肌iEMG差值与呈负相关性(P0.05)。结论:(1)课题研究未发现针刺治疗(尤其是阴经取穴)会增加痉挛型脑瘫患儿肢体肌张力。(2)阴阳经针刺可降低痉挛型脑瘫患儿下肢肌张力、改善肢体痉挛程度、改善乆绳肌及踝跖屈肌群痉挛角度、降低腓肠肌肌电积分值,针刺对于痉挛型脑瘫患儿痉挛状态具有良好的临床疗效。(3)阴阳经不同经穴针刺治疗临床疗效无明显差异。第二部分针刺对痉挛型脑瘫模型大鼠的干预作用及机制研究目的:通过建立缺血缺氧所致的痉挛型脑瘫大鼠模型,观察针刺对于痉挛型脑瘫模型大鼠行为学以及相关蛋白表达的影响,进一步探讨针刺改善痉挛型脑瘫模型大鼠运动功能、促进损伤修复的内在机制。方法:将SPF级7日龄Wistar大鼠50只(其中10只备用),按照随机数字表分为5组,每组8只,分别为正常组、假手术组、幼鼠痉挛型脑瘫模型对照组、针刺Ⅰ组(阴经取穴)、针刺Ⅱ组(阳经取穴)。正常组不作任何处理,假手术组麻醉后分离左颈总动脉但不结扎离断,不作低氧处理,模型对照组及针刺两组结扎并离断左侧颈总动脉,将大鼠置于密闭容器中通以8%氧气与92%氮气的混合气体,构建痉挛型脑瘫大鼠模型。造模成功后分组给予阴经取穴针刺及阳经取穴针刺。于针刺疗程前后行斜坡试验及网屏试验,并于针刺1周后取皮层脑组织行HE染色观察其病理形态变化;行western blot检测胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)及cleaved-caspase3的表达情况;行免疫组织化学染色检测GDNF蛋白的表达情况;行TUNEL染色检测皮层脑组织神经元凋亡情况。结果:缺血缺氧后痉挛型脑瘫模型大鼠运动功能下降,皮层脑组织神经元细胞核固缩明显,细胞凋亡增多,cleaved-caspase3表达水平上调,GDNF表达水平下调;与模型对照组比较,针刺可一定程度改善实验动物运动功能,抑制细胞凋亡,促进cleaved-caspase3表达下调及GDNF表达上调。目前尚无足够证据证明阴阳经不同经穴针刺疗效有显著差异。结论:针刺可改善痉挛型脑瘫大鼠运动协调能力,抑制痉挛型脑瘫模型大鼠神经细胞凋亡,促进损伤的神经细胞修复,其机制可能与其降低cleaved-caspase3蛋白活化水平、促进GDNF表达升高有关。
【学位单位】：广州中医药大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R246.6
【部分图文】：
＞０．０５）。经统计分析，Ｈ组患儿的胎龄、出生体重、年龄、头围、病程无显著性差异逡逑（护＝２．３６０、０．６８３、１．６９７、２．７９９、１．６９４＞０．０５，邋Ｐ＝０．１００、０．５０８、０．１９３、０．０６６、０．１９０逡逑＞化０５）。Ｈ组患儿的基线资料具有可比性。（表１、图１）逡逑２１逡逑
３）转膜缓冲液：甘氨酸２．９ｇ；邋Ｔｒｉｓ５．８ｇ；邋ＳＤＳ０．３化；甲醇２００ｍｌ；加ｄｄＨ２０定逡逑容至邋１０００ｍｌ。逡逑４）逦０．０１ＭＰＢＳ（ＰＨ７．４）：邋ＮａＣ１８．０ｇ；邋ＫＣ１０．２ｇ；邋Ｎａ２ＨＰ０４邋１．４４ｇ；邋ＫＨ２ＰＯ４邋０．２４ｇ；逡逑力口邋ｄｄＨ２０邋至邋１０００ｍｌ。逡逑３N１．２．３主要仪器逦逡逑商品名逦生产商／代理商逦货号／型号邋应用逡逑解剖镜逦上海光学仪器一厂逦Ｑ０３１３８７６邋动物实验逡逑针灸针逦苏州医疗器械用品有限公司邋０．３Ｘ２５ｍｍ邋动物实验逡逑智能型独立通气笼逡逑＇逦苏州市苏杭科技器材有限公司ＩＳ７逦动物实验逡逑ＩＶＣ系统逡逑ＢＩＯ－ＲＡＤ邋小型垂逦一邋ｎ逦ｍｉｎｉ邋Ｐｒｏｌｉｅａｎ逡逑直电泳槽逦ＷＯＲＡＤＣＭ）逦４逡逑超低温冰箱逦Ｔｈｅｒｍｏ邋（美国）逦９９１逦免疫印迹实验逡逑凝胶图像分析仪邋上海天能科技有限公司（上海）Ｔａｎｏｎｌ２２０邋免疫印迹实验逡逑其他仪器和设备包括手术刀柄、手术刀片、止血铅、组织剪、显微摄、抗凝管、逡逑肾形盘，鼠盒，鼠笼等（图１）。逡逑
鼠取出进行复苏，造模完２４ｈ后行神经行为学检测，发现乳鼠向右侧倾倒或转圈，右逡逑前爪及右足屈曲痊李，右侧肢体震颤抖动，肌肉硬度增加，Ｚｅａｌｏｎｇａ评分１？３分、逡逑肌张力在１级及１级Ｗ上者进入本实验［１＂，１心］。（图２）逡逑图２．左图为分离并双重结扎左侧颈总动脉，右图为造模缺氧处理逡逑３N２N３假手术组动物处理逡逑假手术组动物分离左侧颈总动脉但不予结扎，术后缝合皮肤进行复苏，夏苏方法逡逑同模型组。逡逑３N２．３动物治疗及对照组处理逡逑脑d劣资竽Ｐ驮炷３晒Γ玻矗韬蠼胁煌ㄕ氪獭ｅ义希保┱氪蹋勺檠⊙ǎ海纫踅弧⑻６ㄎ徊握铡妒笛檎刖难А匪闹ㄎ唬岷先擞脲义隙锕嵌壤啾龋纫踅蝗∧诓雀叩闵显迹常悖恚嫉毙⊥认拢钡暾鄣愦ε吖呛笤担贝体义希埃玻浚埃常悖恚惶∧诓扔敫峤谥浒枷葜校贝蹋埃玻浚埃常悖恚壮两粑攘粽耄担恚椋睿诲义厦吭唬贝危舱氪蹋敝堋＃ㄍ迹常╁义希常峰义
本文编号：2819081
【学位单位】：广州中医药大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2017
【中图分类】：R246.6
【部分图文】：
＞０．０５）。经统计分析，Ｈ组患儿的胎龄、出生体重、年龄、头围、病程无显著性差异逡逑（护＝２．３６０、０．６８３、１．６９７、２．７９９、１．６９４＞０．０５，邋Ｐ＝０．１００、０．５０８、０．１９３、０．０６６、０．１９０逡逑＞化０５）。Ｈ组患儿的基线资料具有可比性。（表１、图１）逡逑２１逡逑
３）转膜缓冲液：甘氨酸２．９ｇ；邋Ｔｒｉｓ５．８ｇ；邋ＳＤＳ０．３化；甲醇２００ｍｌ；加ｄｄＨ２０定逡逑容至邋１０００ｍｌ。逡逑４）逦０．０１ＭＰＢＳ（ＰＨ７．４）：邋ＮａＣ１８．０ｇ；邋ＫＣ１０．２ｇ；邋Ｎａ２ＨＰ０４邋１．４４ｇ；邋ＫＨ２ＰＯ４邋０．２４ｇ；逡逑力口邋ｄｄＨ２０邋至邋１０００ｍｌ。逡逑３N１．２．３主要仪器逦逡逑商品名逦生产商／代理商逦货号／型号邋应用逡逑解剖镜逦上海光学仪器一厂逦Ｑ０３１３８７６邋动物实验逡逑针灸针逦苏州医疗器械用品有限公司邋０．３Ｘ２５ｍｍ邋动物实验逡逑智能型独立通气笼逡逑＇逦苏州市苏杭科技器材有限公司ＩＳ７逦动物实验逡逑ＩＶＣ系统逡逑ＢＩＯ－ＲＡＤ邋小型垂逦一邋ｎ逦ｍｉｎｉ邋Ｐｒｏｌｉｅａｎ逡逑直电泳槽逦ＷＯＲＡＤＣＭ）逦４逡逑超低温冰箱逦Ｔｈｅｒｍｏ邋（美国）逦９９１逦免疫印迹实验逡逑凝胶图像分析仪邋上海天能科技有限公司（上海）Ｔａｎｏｎｌ２２０邋免疫印迹实验逡逑其他仪器和设备包括手术刀柄、手术刀片、止血铅、组织剪、显微摄、抗凝管、逡逑肾形盘，鼠盒，鼠笼等（图１）。逡逑
鼠取出进行复苏，造模完２４ｈ后行神经行为学检测，发现乳鼠向右侧倾倒或转圈，右逡逑前爪及右足屈曲痊李，右侧肢体震颤抖动，肌肉硬度增加，Ｚｅａｌｏｎｇａ评分１？３分、逡逑肌张力在１级及１级Ｗ上者进入本实验［１＂，１心］。（图２）逡逑图２．左图为分离并双重结扎左侧颈总动脉，右图为造模缺氧处理逡逑３N２N３假手术组动物处理逡逑假手术组动物分离左侧颈总动脉但不予结扎，术后缝合皮肤进行复苏，夏苏方法逡逑同模型组。逡逑３N２．３动物治疗及对照组处理逡逑脑d劣资竽Ｐ驮炷３晒Γ玻矗韬蠼胁煌ㄕ氪獭ｅ义希保┱氪蹋勺檠⊙ǎ海纫踅弧⑻６ㄎ徊握铡妒笛檎刖难А匪闹ㄎ唬岷先擞脲义隙锕嵌壤啾龋纫踅蝗∧诓雀叩闵显迹常悖恚嫉毙⊥认拢钡暾鄣愦ε吖呛笤担贝体义希埃玻浚埃常悖恚惶∧诓扔敫峤谥浒枷葜校贝蹋埃玻浚埃常悖恚壮两粑攘粽耄担恚椋睿诲义厦吭唬贝危舱氪蹋敝堋＃ㄍ迹常╁义希常峰义
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