聚肌胞苷酸加重三氯乙烯致敏诱导的肝脏损伤

发布时间：2017-04-07 07:19

  本文关键词：聚肌胞苷酸加重三氯乙烯致敏诱导的肝脏损伤，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景:三氯乙烯(trichloroethylene,TCE)是一种常见有机溶剂,接触一段时间TCE的工人可能发生职业性三氯乙烯药疹样皮炎(occupational dermatitis medicamentosa-like of trichloroethylene,ODMLT),伴发严重的肝脏损伤。临床观察中发现ODMLT病人在发病前期常出现头痛、发热等病毒性全身感染的症状。此外有研究指出病人血清中抗病毒抗体滴度显著升高,疱疹病毒和巨细胞病毒出现再次激活,佐证了ODMLT与病毒感染密切相关这一现象。前期动物实验表明TCE致敏小鼠肝脏发生免疫损伤,补体激活参与其中。同时相关基础研究提示病毒模拟物聚肌胞苷酸(polyinosine-polycytidylic acid,poly(I:C))可以通过激活Toll样受体-3上调局部B因子水平以促进补体从旁路途径激活。本次研究探讨了腹腔注射poly(I:C)是否可以通过促进补体激活加重TCE致敏导致的肝脏免疫损伤,尝试解释临床中病情与病毒感染之间在机制上的联系。研究目的:以TCE致敏小鼠模型为基础,采用腹腔注射poly(I:C)模拟病人发病前的全身病毒感染状态,观察该处理是否加重TCE致敏介导的小鼠肝脏损伤,检测肝脏局部补体激活程度,探索补体是否参与该免疫损伤放大的过程。研究方法:购买40只6-8周雌性BALB/c小鼠,经适应性饲养后分为溶剂对照组(n=5)、poly(I:C)对照组(n=5)、TCE处理组(n=15)和联合处理组(n=15),联合处理组小鼠于末次TCE激发前3小时腹腔注射50μg poly(I:C)。末次激发后48小时根据皮肤致敏反应评分将小鼠分为致敏或未致敏组,随后麻醉、处死小鼠,收集血清、肝脏。采用全自动生化仪检测肝功能指标ALT和AST,免疫比浊法测定血清补体C3水平,HE染色法观察小鼠肝脏病理学损伤程度,免疫组化法检测肝脏局部补体激活水平和细胞因子沉积水平,Real-time RT-PCR检测肝脏补体C3、补体调节蛋白和B因子的基因转录水平,Western Blotting检测肝脏B因子的蛋白表达相对量。结果:1.皮肤致敏反应评判:溶剂对照组和poly(I:C)对照组小鼠背部均未发现皮炎反应。TCE处理组致敏率6/15(40.0%),联合处理组致敏率5/15(33.3%),两者间无统计学差异。2.肝脏解剖学外观评价和脏器系数比较:溶剂对照组和poly(I:C)对照组肝脏未发现明显病变。非致敏组肝脏也未见明显异常。TCE致敏组肝脏肿大,脏器系数显著高于溶剂对照组(P0.05)。联合处理致敏组肝脏呈黄褐色、质脆易碎,体积肿大,脏器系数显著高于溶剂对照组(P0.05)。3.肝脏病理学研究:溶剂对照组和poly(I:C)对照组肝脏切片未见病理学异常。非致敏组肝脏未见病理学损伤。TCE致敏组肝脏偶见肝细胞肿大和汇管区炎细胞浸润。联合处理组肝脏肝细胞水肿明显,常见气球样变性,汇管区常见中性粒细胞浸润。4.肝功能指标检测结果:poly(I:C)对照组血清ALT和AST水平较溶剂对照组水平无统计学差异。非致敏组肝功能水平较溶剂对照组无统计学差异。TCE致敏组血清ALT和AST均轻微升高,显著高于溶剂对照组水平(P0.05)。联合处理致敏组ALT和AST均明显升高,显著高于溶剂对照组和TCE致敏组水平(P0.05)。5.肝脏细胞因子沉积水平检测:溶剂对照组、poly(I:C)对照组、非致敏组肝脏未检测到TNF-α、IL-1β和IL-6的沉积。TCE致敏组和联合处理组均发现三种蛋白的沉积,其中以TNF-α表达居多,三种蛋白表达水平在两组中无显著差异。6.血清补体C3含量比较:与溶剂对照组水平相比,poly(I:C)对照组和TCE致敏组血清C3水平均无统计学差异。联合处理致敏组水平较溶剂对照组和TCE致敏组水平显著下降(P0.05)。7.肝脏C3转录能力比较:与溶剂对照组肝脏C3转录水平相比,poly(I:C)对照组、TCE致敏组和联合致敏组肝脏C3转录水平均无显著上调或下调。8.肝脏局部补体激活水平检测:溶剂对照组、poly(I:C)对照组、非致敏组肝脏未检测到补体激活。TCE致敏组肝脏有少量C3片段和MAC沉积。联合处理致敏组肝脏有大量补体激活标志性蛋白表达。9.肝脏补体调节蛋白表达比较:与溶剂对照组比较,poly(I:C)对照组和联合处理致敏组的四种补体调节蛋白(CD55、CD59、CD46和Crry)的转录水平均无显著变化,而TCE致敏组肝脏CD59、CD46和Crry的转录水平显著下降(P0.05)。10.肝脏B因子表达比较:与溶剂对照组比较,poly(I:C)对照组和TCE致敏组肝脏B因子表达水平无明显差异。而联合处理致敏组肝脏B因子显著上调(P0.05)。结论:1.腹腔注射poly(I:C)显著加剧TCE致敏诱导的肝脏损伤;2.TCE致敏组肝脏补体激活上调,可能由调节蛋白水平显著下降引起;3.联合处理致敏组肝脏局部补体激活水平显著上升,可能由B因子表达显著上调介导。4.联合处理致敏组血清C3水平显著下降,但并不由肝脏C3转录能力受损介导。
【关键词】：三氯乙烯 补体 肝脏损伤 B 因子
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R114
【目录】：

• 英文缩略词6-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要(Abstract)10-15
• 1. 前言15-19
• 2. 材料与方法19-27
• 2.1 化学试剂、抗体与实验仪器19
• 2.2 动物饲养与处理19-20
• 2.3 小鼠致敏反应视觉评分20-21
• 2.4 生物材料的收集和保存21
• 2.5 血清生化指标测定21
• 2.6 血清补体C3含量测定21-22
• 2.7 小鼠肝脏病理学检查22
• 2.8 免疫组化检测肝脏中蛋白沉积22-23
• 2.9 肝脏总RNA的提取、定量和逆转录23-24
• 2.10 实时定量荧光RT-PCR检测目的基因转录水平24-25
• 2.11 肝脏总蛋白的提取和定量25
• 2.12 Western Blotting检测目的蛋白表达水平25-26
• 2.13 数据库建立和统计分析26-27
• 3. 结果27-36
• 3.1 皮肤致敏反应评分及分组27
• 3.2 肝脏解剖学外观评价及脏器系数计算27-28
• 3.3 肝脏病理学研究结果28
• 3.4 血清肝功能指标结果28-30
• 3.5 肝脏局部细胞因子沉积检测结果30
• 3.6 血清补体C3分子水平检测结果30-32
• 3.7 肝脏补体C3合成水平检测结果32
• 3.8 肝脏局部补体激活检测结果32-33
• 3.9 肝脏补体调节蛋白水平检测结果33-34
• 3.10 肝脏补体B因子水平检测结果34-36
• 4. 讨论36-40
• 5. 结论40
• 参考文献40-44
• 个人简介44-45
• 致谢45-46
• 综述：补体系统与Toll样受体的交互作用46-56
• 1. 补体系统47-49
• 1.1 补体系统简介47
• 1.2 补体激活的调节与抑制47-48
• 1.3 补体系统调节T细胞免疫48-49
• 1.4 细胞内部的补体激活49
• 2. Toll样受体（toll-like receptors, TLRs）49-51
• 2.1 TLRs简介49-50
• 2.2 TLRs信号的调节和抑制50-51
• 2.3 TLRs调节T细胞免疫51
• 3. 补体和TLRs的交互作用51-53
• 3.1 补体调节TLRs介导的炎性反应51-52
• 3.2 TLRs信号放大补体激活52
• 3.3 C3a R和C5a R信号通路和TLRs信号通路交互作用52-53
• 4. 结语53
• 参考文献53-56

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  本文关键词：聚肌胞苷酸加重三氯乙烯致敏诱导的肝脏损伤，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：289937