糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合特征的实验研究

发布时间：2017-04-12 16:04

  本文关键词：糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面愈合特征的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分两种小鼠糖尿病创面愈合模型的比较目的：以糖尿病创面为代表的慢性创面是当前创伤医学的研究热点之一,但目前尚缺乏稳定的动物模型。本实验在链脲佐菌素(STZ)诱导的小鼠糖尿病模型和基因自发突变db/db糖尿病小鼠模型的基础上复制全层皮肤缺损模型,观察创面愈合时间的变化及VEGF-A、Col-Iα mRNA的表达水平,旨在比较两种目前常用的糖尿病小鼠皮肤缺损创面模型的优缺点,为后续开展糖尿病创面愈合的动物实验研究提供依据。方法：1)24只4周龄ICR雄性小鼠随机分为两组,其中对照组(ND组)12只,高脂饲料+STZ诱导组(STZ组)12只,分别给予普通鼠粮或高脂饮食喂养4周后,STZ组给予腹腔注射8Omg/kg STZ(隔两日后重复注射)诱导糖尿病。建模成功后4周复制背部全层皮肤缺损创面模型。2)10～11周龄C57BL/KsJ(ddb/ddb)小鼠(db/db组),SPF级C57BL/KsJ(db/+)小鼠(ddb/+组)各12只,雌雄各半。3)四组小鼠均于异氟烷吸入麻醉后进行背部全层皮肤缺损创面模型的复制。术后第0、3、7、10、14、17、21、24、28天分别进行创面换药、图像采集,并于伤后第7、14天创面取材取材。NIH ImageJ图像分析软件进行创面愈合率的测定,Real time-PCR检测创面组织VEGF-A、Col-Iα mRNA的表达。结果：与对照组(ND组与db/+组)相比,糖尿病小鼠(STZ组与db/db组)创面愈合时间延迟,尤其在伤后第7、10、14天愈合率与相应的对照组相比有显著差异(P0.05)。而在两种糖尿病小鼠模型间,虽创面面积在伤后第3天均有不同程度的扩大,但3天以后db/db组的创面愈合进程较STZ组延迟更为明显,愈合时间显著延长。与对照组(ND组与db/+组)相比,糖尿病小鼠(STZ组与db/db组)新生上皮化长度减小,尤其在伤后第7天与相应对照组相比有着统计学差异(P0.05)。伤后14天两组虽无统计学意义,但两个糖尿病组小鼠新生上皮长度仍低于对照组。创面修复相关基因的real time-PCR结果显示,伤后第7天,两个糖尿病组创面组织VEGF-A、Col-Iα mRNA表达水平均低于对照组(P0.05),伤后第14天糖尿病组上述两种mRNA的表达水平仍低于相应的对照组,但无统计学差异。结论：两种糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面模型均表现出愈合延迟、创面修复相关mRNA表达水平下降的特点,但在创面愈合延迟的程度上,基因自发突变的糖尿病db/db小鼠更适合进行糖尿病慢性创面的研究。第二部分糖尿病db/db小鼠全层皮肤缺损创面愈合特性的研究目的：在前期研究的基础上,进一步探索自发基因突变的糖尿病db/db小鼠皮肤全层缺损创面愈合过程中的病理生理特征,了解其愈合延迟的主要影响因素,为应用其开展糖尿病慢性创面愈合机制及治疗干预的后续研究提供理论基础。方法：10-11周龄自发突变糖尿病C57BL/KsJ (db/db)小鼠和C57BL/KsJ(db/+)健康对照小鼠各12只,雌雄各半。其中db/db小鼠作为实验组(简称db/db)、db/+小鼠作为对照组(简称db/+)。麻醉下复制1 cm ×1 cm的背部皮肤全层缺损创面,第0、3、7、10、14、17、21、24、28天分别进行创面换药、图像采集,并于伤后第7、14天创面取材取材。NIH ImageJ图像分析软件进行创面愈合率的测定,Real time-PCR检测创面组织VEGF-A、VEGFR2、IL-6、CXCR4、 CXCL12、Col-Iα、α-SMA mRNA的表达,并进行CD31免疫组化染色观察创面组织新生血管形成程度。结果：与正常对照db/+小鼠相比,糖尿病db/db小鼠创面愈合进程延迟,前者伤后17天基本愈合,而后者则延迟到伤后28天。就创面愈合率而言,伤后第7、10、14天,糖尿病db/db小鼠创面愈合率显著降低(P0.05),同时,伤后第7、14天新生上皮长度亦显著下降(第7天,P0.05；第14天,P0.01)。实时定量PCR结果显示,糖尿病db/db小鼠创面组织血管形成相关因子VEGF-A、VEGFR2 mRNA相对表达量在伤后第7、14天均显著减少(P0.05),炎症因子IL-6 mRNA相对表达量在伤后第7、14天亦显著减少(P0.05),而趋化因子CXCL12及其受体CXCR4 mRNA的相对表达量虽呈下降趋势,但与正常对照db/+小鼠相比并无统计学差异(P0.05)。细胞外基质成分Col-Iα mRNA的相对表达量在伤后第7天明显减少(P0.05),而α-SMA mRNA虽在伤后第弟7、14天均低于正常对照组db/+小鼠但并无无统计学差异(P0.05)。创面组织切片CD31染色结果提示,糖尿病db/db小鼠创面新生血管形成在伤后第7天显著低于正常对照组db/+小鼠(P0.05)。结论：自发基因突变的糖尿病db/db小鼠全层皮肤缺损创面模型具有显著的愈合延迟,并表现出与临床患者相似的局部炎症反应低下、炎性细胞浸润减少以及表皮增殖、细胞外基质沉积及新生血管形成受抑的愈合特征,可作为糖尿病慢性创面愈合研究的较可靠动物模型。
【关键词】：糖尿病小鼠 STZ 慢性创面 糖尿病创面
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R641;R587.2
【目录】：

• 缩略词表4-6
• 摘要6-10
• Abstract10-14
• 第一部分 小鼠糖尿病全层皮肤缺损模型的建立14-36
• 引言14-16
• 实验动物、试剂及主要设备16-18
• 方法18-23
• 结果23-31
• 讨论31-34
• 参考文献34-36
• 第二部分 糖尿病db/db小鼠全层皮肤缺损创面愈合特性的研究36-65
• 引言36-38
• 实验动物,试剂及主要设备38-40
• 方法40-47
• 结果47-56
• 讨论56-61
• 结论61-62
• 存在不足及改进方法62-63
• 参考文献63-65
• 综述65-77
• 参考文献74-77
• 硕士研究生期间发表文章情况77-78
• 致谢78

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本文编号：301622