自噬在七氟烷诱导的APP/PS1转基因小鼠空间记忆损伤中的作用

发布时间：2021-04-12 18:19

　　背景:阿尔兹海默病（Alzheimer disease,AD）是老年痴呆最常见的病因,表现为认知功能进行性下降,细胞内Aβ积聚和细胞外斑块形成是其特征性病理变化。实验室研究发现麻醉药物可以引起Aβ增多并损伤认知功能,提示麻醉后认知功能障碍（Postoperative cognitive dysfunction,POCD）与AD可能具有某些相似的分子机制。自噬是细胞内的重要降解机制,自噬溶酶体体积增大、功能受损致使神经细胞内Aβ积累可促进AD病理进展。我们前期研究表明3%七氟烷麻醉4小时可引起APP/PS1小鼠认知功能障碍,本课题主要探讨自噬在七氟烷导致空间学习记忆损伤中的作用。实验方法:6月龄APP/PS1转基因AD模型小鼠随机分为对照组（Control）、七氟烷（Sevo）组,雷帕霉素（Rap）组,雷帕霉素+七氟烷（Rap+Sevo）组。麻醉前三周Rap和Rap+Sevo组腹腔注射雷帕霉素隔天一次,Control组和Sevo组注射溶剂,最后一次注射24h后,Control和Rap组吸入60%空氧混合气,Sevo和Rap+Sevo组吸入60%空氧混合气+3%七氟烷4h。麻醉后24h取小... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

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英文摘要
1 前言
2 材料与方法
    2.1 实验动物
    2.2 实验仪器
    2.3 实验试剂
    2.4 试剂配制
    2.5 实验方法
        2.5.1 实验分组和麻醉（一）
        2.5.2 实验分组和药物处理（二）
    2.6 组织提取及保存
    2.7 免疫印迹实验
        2.7.1 海马组织蛋白提取及样品制备
        2.7.2 蛋白浓度测定（Braford法）
        2.7.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）
        2.7.4 上样
        2.7.5 转膜
        2.7.6 染色,封闭
        2.7.7 免疫杂交
        2.7.8 显影与定影
        2.7.9 图像分析
    2.8 免疫荧光
    2.9 酶联免疫吸附实验（ELISA）检测Aβ40和Aβ
        2.9.1 分组
        2.9.2 加样
        2.9.3 加酶标溶液
        2.9.4 温育
        2.9.5 加辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin
        2.9.6 显色
        2.9.7 终止
        2.9.8 读板
    2.10 Morris水迷宫实验
    2.11 统计分析
3 结果
    3.1 七氟烷增加APP/PS1小鼠海马细胞内Aβ表达
    3.2 ELISA结果表明七氟烷增加APP/PS1小鼠海马细胞内Aβ40表达
    3.3 七氟烷增加APP/PS1小鼠海马细胞外Aβ斑块聚集
    3.4 七氟烷引发APP/PS1小鼠海马中自噬
    3.5 七氟烷引起APP/PS1小鼠海马中出现巨大自噬溶酶体
    3.6 七氟烷损伤自噬的降解功能
    3.7 雷帕霉素减少巨大自噬溶酶体
    3.8 雷帕霉素改善自噬流
    3.9 雷帕霉素治疗的七氟烷麻醉小鼠细胞外Aβ斑块减少
40和Aβ₄₂表达减少">    3.10 雷帕霉素治疗的七氟烷麻醉小鼠细胞中可溶性Aβ₄₀和Aβ₄₂表达减少
    3.11 雷帕霉素逆转七氟烷引起的认知功能损伤
4 讨论
5 结论
6 参考文献
附录
致谢
综述 术后认知功能障碍和阿尔兹海默病中的自噬
    参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]吸入麻醉药增加β淀粉样蛋白的寡聚化反应和细胞毒性[J]. Roderic G.Eckenhoff M.D.,Jonas S.Johansson M.D. Ph.D.,Huafeng Wei M.D. Ph.D.,Anna Carnini Ph.D.,Baobin Kang M.D.,Wenlin Wei M.D.,Ravindernath Pidikiti M.D.,Jason M.Keller B.Sc.,Maryellen F.Eckenhoff Ph.D.,王耀岐.  国外医学.麻醉学与复苏分册. 2004(05)



本文编号：3133755