乌司他丁对免疫抑制状态下重症肺部感染小鼠巨噬细胞分化的影响

发布时间：2017-04-24 15:01

  本文关键词：乌司他丁对免疫抑制状态下重症肺部感染小鼠巨噬细胞分化的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景重症肺部感染是临床常见的移植术后急危重症,免疫抑制状态下过度炎症发病机制较复杂病死率高。各类肺内及肺外影响因素导致各种各样的炎症介质的释放。巨噬细胞亚群是重要的炎性反应调节细胞,其在炎性反应过程当中分泌不同的细胞因子、趋化因子导致“细胞因子风暴”,使炎症反应不断扩大,巨噬细胞作为细胞因子风暴的启动细胞,而后间接或直接地参与过度炎症反应过程,致使机体失控的炎性反应,造成恶性循环加剧机体损伤。目的观察免疫抑制状态下重症肺部感染小鼠肺组织及肺泡灌洗液(BALF)中巨噬细胞的数目和促炎和抗炎因子的变化及乌司他丁干预后其变化;探讨免疫抑制状态下重症肺部感染的发病机制及乌司他丁的干预效果。方法30只雄性Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、乌司他丁组,每组10只;采用甲基强的松龙和内毒素制备免疫低下急性肺损伤小鼠模型,随后用乌司他丁干预治疗。检测气管给药后3h、6h各组小鼠的呼吸频率(R),气管给药后6h乌拉坦麻醉处死小鼠收集并检测肺泡灌洗液(BALF)中肺泡巨噬细胞及中性粒细胞的数量,肺组织切片HE染色观测病理变化,采用免疫组化法检测肺组织CD163的阳性表达,实时定量PCR检测肺泡灌洗液(BALF)中Ml型标记物(TNF-α、IL-6、INOS)mRNA的表达;real-time PCR检测肺泡灌洗液(BALF)M2型标记物(CD206、Arg-1、IL-10)mRNA的表达。结果(1)模型组较正常组小鼠呼吸浅快,偶有出现点头呼吸,呼吸窘迫现象,呼吸频率增快,乌司他丁组较模型组小鼠呼吸平缓,偶有出现呼吸急促,呼吸平稳,呼吸频率放慢。(2)肺组织大体观:正常组肺组织表面质地柔软、弹性良好,组织密度均匀,包膜完整光滑,颜色浅红;模型组肺组织弥漫性大面积出血,组织肿胀,颜色不均匀;乌司他丁组肺组织肿胀充血,但较模型组肺组织损伤程度轻,没有大的局灶性出血,散在出血点。(3)肺组织病理形态学改变:正常组肺组织肺泡壁较薄,结构清晰完整,肺泡间隔和肺泡腔内无炎性细胞汇集、浸润,肺组织中的血管无明显破裂、扩张;模型组肺组织破坏严重,肺泡结构不完整,肺泡壁塌陷,肺泡囊破裂,有大肺泡的形成,肺泡腔内大量的红细胞、炎性细胞浸润,甚至肺泡腔结构消失;肺泡水肿,肺间质增宽;乌司他丁组肺组织病变较模型组轻,但也有肺泡结构不完整,肺泡腔炎性细胞浸润等改变。(4)模型组较正常组balf中的巨噬细胞和中性粒细胞数目增多;乌司他丁组较模型组巨噬细胞和中性粒细胞数目减少,差异具有统计学意义(p0.05)。(5)模型组较正常组肺组织中cd163阳性率的表达增高差异具有统计学意义(p0.05)。(6)模型组较正常组balf中ml型标记物(tnf-α、il-6、inos)的mrna的表达均降低(p0.05)。乌司他丁组较模型组balf中ml型标记物(tnf-α、il-6、inos)的mrna的表达均降低差异具有统计学意义(p0.05)。模型组较正常组balf中m2型标记物(cd206、arg-1、il-10)的mrna的表达均增高(p0.05);乌司他丁组较模型组balf中m2型标记物(cd206、arg-1、il-10)的mrna的表达无统计学意义(p0.05)。结论(1)免疫抑制状态重症肺部感染早期机体处于CARS阶段;存在M1巨噬细胞的免疫麻痹,M2巨噬细胞的异常活化;(2)乌司他丁能够改善肺损伤的程度,对急性肺损伤中小鼠的肺有保护作用;(3)乌司他丁对免疫低下内毒素感染小鼠肺保护机制可能通过抑制M1巨噬细胞,调节非特异性免疫功能达到了免疫调理的作用本实验所得的论断可能为今后临床上治疗器官移植后肺部感染提供新的治疗思路。
【关键词】：乌司他丁 重症感染 巨噬细胞 免疫抑制
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R617
【目录】：

• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 英汉缩略词对照表12-14
• 前言14-18
• 1、材料与方法18-30
• 1.1 实验材料18-20
• 1.1.1 动物18
• 1.1.2 主要试剂18-19
• 1.1.3 主要仪器19
• 1.1.4 主要溶液的配制19-20
• 1.2 实验方法20-30
• 1.2.1 模型的建立20-21
• 1.2.2 一般情况观察21
• 1.2.3 肺脏干湿比重21
• 1.2.4 支气管肺泡灌洗液（BALF）的收集方法21-22
• 1.2.5 瑞氏-吉姆萨染色22
• 1.2.6 苏木素-伊红（HE）染色22-23
• 1.2.7 免疫组织化学23-25
• 1.2.8 实时荧光定量PCR25-29
• 1.2.9 统计学分析29-30
• 2、结果30-41
• 2.1 一般情况变化30
• 2.2 肺脏干湿比重变化30-31
• 2.3 BALF中细胞涂片形态观察31-32
• 2.4 BALF中有核细胞总数和巨噬细胞百分比计数32
• 2.5 HE染色肺组织病理变化32-35
• 2.6 小鼠肺组织中CD163阳性细胞平均光密度的测定结果35-36
• 2.7 BALF中MI(TNF-A、INOS、IL-6)的mRNA表达变化36-38
• 2.8 BALF中M2(CD206、Arg-1、IL-10)的mRNA表达变化38-41
• 3、讨论41-47
• 4、结论47-48
• 参考文献48-52
• 附录（综述）52-60
• 参考文献58-60
• 读学位期间发表的学术论文目录60-61
• 致谢61-62

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本文编号：324401