自噬对乳化异氟烷诱导神经干细胞损伤的调节作用的研究

发布时间：2017-05-10 02:00

  本文关键词：自噬对乳化异氟烷诱导神经干细胞损伤的调节作用的研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的探讨与JNK通路相关的全身麻醉药物乳化异氟烷(EI)对原代培养的SD大鼠胚胎神经干细胞增殖的影响以及自噬调控在此种细胞增殖影响中发挥的效应。方法购得从妊娠期第14天的SD大鼠皮层中分离出来的原代胚胎神经干细胞,种植于96孔板后置于温箱中培养,传至3-5代后,未分化表型保持在85%以上,1.建立体外培养胚胎神经干细胞接受乳化异氟烷处理的模型:步骤(1)同批细胞随机分为6组(n=8),正常组(N组),脂肪乳组(F组),乳化异氟烷处理组(EI1组,EI2组,EI3组,EI浓度分别为8.12m M,9.80m M,12.04m M),20u M SP600125+9.80m M EI组(EI2SP组)。细胞处理12小时后,立即采用噻唑兰(MTT)法分别检测6组胚胎神经干细胞的细胞活力;分别检测凋亡细胞的比率以及JNK和Caspase3的蛋白表达量;步骤(2)选取步骤(1)中的N组、F组、EI2组,分别在6,12,24小时使用GFP-LC3B转染技术检测自噬现象的发生,检测Beclin-1和LC3B蛋白表达量的变化。2.建立自噬干扰下乳化异氟烷处理后的细胞模型:分为5组(n=8),正常组(N组),脂肪乳组(F组),EI2组,10m M 3-MA+EI2组(EI2M组),25n M BAF+EI2组(EI2B组)。12小时稳定培养后,立即采用MTT法检测5组细胞胚胎神经干细胞的细胞活力;分别检测凋亡细胞的比率的变化。结果1.(1)与N组比较,F组各项指标无明显差异,EI组细胞增殖的抑制率以及细胞凋亡率明显升高(P0.001),EI组明显上调Caspase3的表达量(P0.05),EI组内三个浓度之间比较,细胞增殖的抑制率(P0.01),凋亡率以及Caspase3的蛋白表达水平(P0.05)之间的差异均有统计学意义;与EI2组比较,EI2SP组细胞增殖的抑制率明显下降(P0.05),EI2SP组细胞的凋亡率明显降低(P0.001),EI2SP组明显下调Caspase3的表达量(P0.05)。(2)选取的N组、F组、EI2组在6,12,24小时分别观察检测的结果显示,三个时间段内,与N组和F组比较,EI2组中细胞LC3B和Beclin-1的蛋白表达水平显著上升(P0.05),GFP-LC3B的荧光标记量明显上升(P0.001)。2.与N组,F组比较,EI2组细胞增殖的抑制率明显升高(P0.01),EI2组中细胞的凋亡率显著上升(P0.001);与EI2组比较,EI2M组细胞增殖的抑制率明显升高(P0.01),细胞的凋亡率显著上调(P0.05);与EI2组比较,EI2B组细胞增殖的抑制率以及细胞凋亡率显著上升(P0.01)。结论JNK通路参与促进了乳化异氟烷引起的大鼠胚胎神经干细胞的增殖抑制,此过程中自噬的发生对神经干细胞的凋亡具有一定的保护作用。
【关键词】：乳化异氟烷 神经干细胞 JNK通路 自噬 凋亡
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R614
【目录】：

• 缩略语与符号6-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-15
• 第一部分 JNK通 路相关的乳化异氟烷对神经干细胞增殖影响的机制研究15-30
• 1.材料和试剂15-17
• 2.实验方法17-22
• 3.统计分析22-23
• 4.实验结果23-30
• 第二部分 自噬调控在乳化异氟烷引起的神经干细胞损伤中发挥作用的研究30-38
• 1.材料和试剂30-31
• 2.实验方法31-33
• 3.统计分析33-34
• 4.实验结果34-38
• 讨论38-41
• 结论41-42
• 参考文献42-46
• 附录46-47
• 本人简历46
• 在校期间的研究成果目录46-47
• 致谢47-48
• 综述 异氟醚对发育神经毒性的研究进展48-56
• 参考文献54-56

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