促红细胞生成素抑制血管重构的影响及机制的研究

发布时间：2017-05-14 10:11

  本文关键词：促红细胞生成素抑制血管重构的影响及机制的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:研究促红细胞生成素(EPO)对血管新生内膜及其胶原分泌的影响,探讨转化生长因子?1(TGF-?1)在其中的作用,并阐述TGF-?1/MMP-2(基质金属蛋白酶-2)信号传导参与的作用机制。通过大鼠颈动脉球囊损伤动物模型,观察EPO抑制血管内皮损伤后血管重构的影响,进一步阐述再狭窄相关发病机制,为临床应用提供新思路。方法:1、实验动物分组及造模将清洁级健康SD大鼠75只(雌雄不限),按照随机分配原则将大鼠分为五组,对照组,损伤组(球囊损伤颈动脉组),EPO组(损伤组基础上行EPO(3000U/kg)腹腔注射干预),TGF-?1组(EPO组基础上颈动脉外膜普朗尼克凝胶固定TGF-?1(0.5mg/ml)干预),MMP-2组(EPO组基础上颈动脉外膜普朗尼克凝胶固定MMP-2(0.5mg/ml)干预)。采用PTCA球囊损伤大鼠单侧颈动脉的方法制造模型。每组大鼠按不同的时相点分别于术后第1、7、14天麻醉后处死。术前心尖内取血,并将术侧大鼠颈动脉切取2cm,所有血管组织标本取出后,用于相关指标的检测。2、实验指标检测大鼠血管组织行常规切片和HE染色,观察组织病理学变化。行ELISA法检测大鼠血清中VEGF和TNF-α水平,选用Masson染色方法对胶原纤维进行染色。应用免疫组化染色检测血管组织中的TGF-?1、MMP-2的表达。采用Real-time PCR法检测eNOS mRNA水平。采用Western blot法检测P-Akt和T-Akt蛋白的表达。3、病理结果分析采用数字图像分析系统对血管标本形态学进行统计学计数分析。应用胶原纤维表达面积与其血管层面积的百分比作为胶原密度。经免疫组化评分方法作为TGF-?1、MMP-2的表达结果,应用目的基因的相对表达量作为eNOS mRNA的水平。用凝胶成像系统成像分析,以光密度相对灰度值作为P-Akt和T-Akt蛋白的表达结果。结果:1、血管组织新生内膜厚度及面积比结果:①对照组之间各时间点无显著差异(p0.05);②损伤组对比对照组,内膜损伤程度增加,新生内膜及面积比增加,并随时间增加而加剧,各时间点差异有显著性(p0.05);③epo组对比损伤组新生内膜厚度明显减轻,面积比明显减小;但7d与14depo组之间无明显差异(p0.05);③tgf-?1组、mmp-2组对比epo组新生内膜厚度及面积比增加,与epo组比较有明显差异(p0.05);2、血清vegf和tnf-α表达结果:①对照组各时间点无明显差异(p0.05);②1d损伤组vegf及tnf-α表达即刻升高,至7d后仍维持在较高水平,至14d明显增高;epo组各时间点水平较对照组升高,但与损伤组比较明显降低,有明显差异(p0.05);③tgf-?1组、mmp-2组在损伤即刻与损伤组无明显差别,至7d、14d后,两组vegf及tnf-α较epo组表达升高,差异具有显著性(p0.05):3、血管组织胶原纤维表达结果①对照组各时间点无明显差异(p0.05);②1d损伤组胶原表达减低,7d再次升高,14d达到峰值;epo组各时间点较损伤组值减低,差异有显著性(p0.05);③14d损伤组、14dtgf-?1组较对照组染色面积值有升高,14dtgf-?1组中较14depo组升高明显,且差异有显著性(p0.05)。4、血管组织tgf-?1免疫组化染色评分:①对照组各时间点可见tgf-?1少量表达,无明显差异(p0.05);损伤组、tgf-?1组该因子表达增强,与对照组比较,差异有显著性(p0.05);②损伤组中tgf-?1表达在7d,14d表达开始明显增加,与1d比较有差异显著性(p0.05)。③epo组各时间点较损伤组表达减轻,差异有显著性(p0.05);④tgf-?1组tgf-?1表达明显增加,染色加深,且随着时间的延长,表达逐渐增加,与损伤组同一时间点比较,有差异显著性(p0.05)。5、血管组织mmp-2免疫组化染色评分:①对照组各时间点表达少量,无明显差异(p0.05);②损伤组、tgf-?1组、mmp-2组与对照组比较,mmp-2值表达有差异显著性(p0.05);③但同一时间点tgf-?1组与mmp-2组间mmp-2的表达无显著差异(p0.05)。④epo组各时间点较损伤组表达减轻,差异有显著性(p0.05);6、血管组织enosmrna的水平结果:①损伤组enosmrna水平较对照组降低,两者比较有明显差异(p0.05);②epo组enosmrna水平较损伤组明显增加,差异有显著性(p0.05);③TGF-?1及MMP-2组较EPO组,eNOS mRNA水平减低,但以TGF-?1组减低明显,且差异有显著性(P0.05)7、血管组织P-Akt和T-Akt蛋白表达结果:①损伤组中P-Akt和T-Akt表达与对照组之间比较差异不明显(P0.05)。②EPO组中以P-Akt表达增加最为明显,与损伤组比较,差异具有显著性(P0.05);③TGF-?1组中P-Akt的表达减低明显,与EPO组比较差异具有显著性,但T-Akt表达无明显变化(P0.05)。④MMP-2组中P-Akt表达与EPO组降低,差异具有显著性,但T-Akt表达较EPO组无明显降低,差异具有显著性。结论:1、损伤组TGF-?1、MMP-2、VEGF、TNF-α等细胞因子的表达是增强的。2、EPO组的新生内膜厚度、内膜与中膜面积比,及TGF-?1、MMP-2、VEGF、TNF-α等细胞因子表达较损伤组是减弱的。3、胶原纤维能在再狭窄的发病过程中起重要作用。4、促红细胞生成素能够通过激活PI3-K/Akt信号通路,增强e NOS表达,调控下游信号分子表达来抑制新生血管内膜增生。
【关键词】：促红细胞生成素 球囊损伤 再狭窄 TGF-?1 MMP-2 eNOS Akt
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541.4
【目录】：

• 摘要3-6
• ABSTRACT6-12
• 第1章 引言12-14
• 第2章 实验材料和实验方法14-22
• 2.1 实验材料14-15
• 2.1.1 实验动物14
• 2.1.2 药品及试剂14-15
• 2.1.3 主要仪器及器材15
• 2.2 方法15-22
• 2.2.1 动物分组15-16
• 2.2.2 大鼠颈动脉脉损伤模型的建立16
• 2.2.3 标本的获取及处理16-17
• 2.2.4 血管组织标本形态学17
• 2.2.5 ELISA法检测大鼠血清中VEGF和TNF-α的水平17-18
• 2.2.6 马森氏胶原纤维染色18-19
• 2.2.7 免疫组织化学染色法检测TGF-?1 和MMP-2 的表达19
• 2.2.8 RT-PCR检测组织中eNOS mRNA的水平19-20
• 2.2.9 Western Blot法检测血管组织中P-Akt和T-Akt的表达20-21
• 2.2.10 数据统计及处理21-22
• 第3章 结果22-35
• 3.1 大鼠颈动脉球囊损伤模型构建结果22
• 3.2 血管组织病理学评价22-25
• 3.2.1 光镜下血管组织形态学大体观察：22
• 3.2.2 血管组织新生内膜厚度的结果分析22-23
• 3.2.3 血管组织新生内膜与中膜面积比的结果分析23-25
• 3.3 ELISA法检测VEGF和TNF-α水平结果分析25
• 3.4 胶原纤维染色结果分析25-29
• 3.5 血管组织免疫组化染色评分29-33
• 3.5.1 TGF-?1 免疫组化染色评分29-30
• 3.5.2 MMP-2 免疫组化染色评分30-33
• 3.6 大鼠血管组织中eNOS mRNA的结果分析33-34
• 3.7 大鼠血管组织中P-Akt和T-Akt的表达结果分析34-35
• 第4章 讨论35-42
• 4.1 关于大鼠颈动脉损伤模型的建立35-36
• 4.2 再狭窄概述36-37
• 4.3 细胞因子在再狭窄过程中的作用37-39
• 4.4 胶原在再狭窄发生过程中的作用39-40
• 4.5 促红细胞生成素在抑制血管重构过程中的作用40-42
• 第5章 结论42-43
• 致谢43-44
• 参考文献44-48
• 综述48-54
• 参考文献52-54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前9条

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本文编号：364885