血管内皮生长因子（VEGF）对caspase-3表达的影响及梗死区缺氧损伤的心肌细胞保护的机制研究

发布时间：2017-07-17 22:25

  本文关键词：血管内皮生长因子（VEGF）对caspase-3表达的影响及梗死区缺氧损伤的心肌细胞保护的机制研究

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【摘要】：背景及目的:冠心病是一种发病率、死亡率和致残率极高的常见病和多发病,严重威胁人类健康,已成为严重的社会公共卫生问题之一。心肌缺血发生时,能够及时、有效地恢复缺血心肌的血流灌注,是减少缺血心肌损伤和恢复心脏功能的重要措施之一,也是改善缺血性心脏病患者预后的关键。但大量基础和临床研究[1,2]证实,缺血心肌的再灌注本身也会诱发一系列新的病理生理变化,进一步加重心肌组织细胞的损伤,出现再灌注心律失常、心肌舒缩功能障碍、代谢异常以及心肌超微结构改变等,即发生心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury,MIRI),直接影响患者的心脏功能和预后。心肌缺血再灌注(ischemic reperfusion,I/R)损伤是极其复杂的病理生理过程,主要是缺氧器官在恢复血流和氧输送的情况下心肌损伤加剧的现象[3]。观察缺血-再灌注小鼠6小时后,HIF-1及VEGF的表达,诱导缺氧心肌细胞后给予生理盐水、VEGF、VEGF阻断剂,检测HIF1a、VEGF、cleaved-caspase-3、PLB、Ca MK-II、SERCA2a、Bcl-2的表达;探讨VEGF对缺氧心肌细胞保护的可能机制。方法:1.选取同批次清洁级雄性健康昆明小鼠,开胸结扎小鼠左冠状动脉前降支,构建急性心肌梗死经典模型;应用免疫组化技术检测HIF1a、caspase-3在细胞内分布的变化,在用荧光定量PCR技术分析正常小鼠心肌组织及梗死边缘区心肌组织HIF1a、caspase-3的表达量的变化。2.用CoCl2诱导心肌细胞缺氧模型,用蛋白印迹法检测缺氧心肌细胞HIF1a、VEGF及caspase-3蛋白水平。使用荧光定量PCR技术分析缺氧心肌细胞HIF1a、VEGF及caspase-3表达量的变化。3.分别给三组缺氧心肌细胞注射共计100μl的0.9%的生理盐水、添加VEGF阻断剂AEE788至终浓度10u M和100ng/ml VEGF;应用蛋白印迹法方法分别分析三组缺氧心肌细胞6小时后Bcl-2、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II蛋白水平;使用荧光定量PCR技术分析三组缺氧心肌细胞Bcl-2、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II的表达水平。4.采用荧光指示剂Fura-2 AM方法进行细胞内钙离子的测定,对肌浆网摄钙能力进行测定。结果:1.急性心肌梗死模型:采用前胸结扎左冠状动脉前降支构建小鼠急性心肌梗死。实验中常见的死亡原因有:出血、麻醉不当、肺损伤、神经损伤、气道阻塞、感染、心律失常等。2.缺氧心肌细胞模型:采用浓度为50uM的CoCl2诱导缺氧心肌细胞模型,免疫组化显示:缺氧心肌细胞内HIF1a、caspase-3的分布明显异常,荧光定量PCR技术分析显示:HIF1a、caspase-3的表达明显升高。3.缺氧心肌细胞:应用蛋白印迹法方法显示HIF1a、VEGF、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II的蛋白水平较正常心肌细胞明显升高,荧光定量PCR技术分析HIF1a、VEGF、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II的表达水平较正常心肌细胞也明显升高。4.缺氧心肌细胞、缺氧+VEGF、缺氧+AEE 788:应用蛋白印迹法方法显示缺氧+VEGF组的HIF1a、VEGF、cleaved-caspase-3、SERCA2a、PLB及Ca MK-II的蛋白水平最高,缺氧+AEE 788组的以上蛋白水平最低。荧光定量PCR技术分析以上蛋白的表达水平有相似的结果。5.用荧光指示剂Fura-2 AM方法进行细胞内钙离子的测定,缺氧心肌细胞内Fura-2 AM结合钙离子的能力减弱,其中缺氧+AEE 788组最弱。结论血管内皮生长因子(VEGF)对早期缺氧或缺血性损伤过程中的心肌细胞具有保护作用,VEGF的这种保护作用有望成为急性心肌梗死及缺血-再灌注损伤心肌细胞的治疗靶点。
【关键词】：低氧血管内皮生长因子(VEGF) 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3) BCl-2 钙成像
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R541.4
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-10
• 中英文缩略词表10-12
• 引言12-14
• 材料与方法14-28
• 结果28-41
• 讨论41-44
• 结论44-45
• 参考文献45-50
• 综述 血管内皮生长因子（VEGF）对梗死心肌细胞Ca2+浓度影响和可能机制50-62
• 参考文献57-62
• 个人简历、在学期间发表的学术论文62-63
• 致谢63

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