糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞保护作用的研究

发布时间：2017-08-02 03:03

  本文关键词：糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞保护作用的研究

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【摘要】：第一部分糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞保护作用的应用研究目的：糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)是糖尿病(diabetes mellitus, DM)的常见眼部并发症之一,同时也是致盲的主要因素。本研究在建立实验性糖尿病大鼠模型的基础上,观察糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞形态学结构的影响,对小胶质细胞标记物CD68和胶质源性神经营养因子(glial cell line derived neurotropic factor, GDNF)表达的影响,探讨糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞的保护作用。方法：选用SPF级SD雄性六周龄大鼠24只,对除6只正常组外的其它大鼠经腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotoein, STZ) (60mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型,正常组大鼠经腹腔注射等体积生理盐水。72小时后取大鼠尾尖静脉血测血糖,连续3天血糖"g16.7mmol/L者则为造模成功。造模成功后随即将糖尿病大鼠分为模型组6只、治疗组6只、对照组6只。治疗组和对照组在造模成功后即开始进行干预,给药时间为每天上午8-10时,给药方式为灌胃。治疗组(炙黄芪、红参、丹参、三七粉、茯苓、桂枝、地龙等经水煎浓缩,浓度为1g/mg),给药量为10g／(kg·d)；对照组(多贝斯)给药量为250mg/(kg·d)。每天观察大鼠的毛色、形态及尿量,每2周测大鼠血糖、体重。经过9个月的实验周期后,用10%水合氯醛过量麻醉以处死大鼠,摘取眼球,制备视网膜切片,通过光学显微镜和电子显微镜观察大鼠视网膜形态结构的改变；运用免疫组织化学染色法(Envision法)检测CD68和GDNF在视网膜上的表达,通过图像分析软件测量免疫组化显色的光密度值并进行定量分析。结果：(1)血糖：造模前大鼠血糖无明显差异(P0.05)；造模成功后,糖尿病大鼠的血糖在各个时间点与正常组相比明显升高(P0.05)。(2)体重：造模前大鼠体重无明显差异(P0.05)；造模后第6周,糖尿病大鼠的体重在各个时间点与正常组相比明显减轻(P0.05)。(3)视网膜形态学观察：光镜下：与正常组相比,模型组大鼠视网膜各层排列紊乱,神经纤维层增厚、水肿；神经节细胞数量减少,细胞核固缩,染色质边集现象明显,可见部分神经节细胞坏死、核溶解；内丛状层水肿明显；内核层胞体排列紊乱、疏松,空泡样变性；外核层胞体排列紊乱、疏松；感光细胞呈丝状排列,尚整齐,可见空泡样改变；治疗组与模型组和对照组相比,视网膜各层排列明显整齐,神经纤维层水肿不明显,神经节细胞见部分核固缩,偶见空泡样改变,内丛状层排列完整、紧密,感光细胞外节见少量空泡样改变明显减轻。电镜下：与正常组大鼠相比,模型组大鼠视网膜神经节细胞间隙增大,细胞核浓缩明显,染色质见边集现象,细胞间可见增生活化的小胶质细胞包绕；外核层排列紊乱、疏松,核膜皱缩、内陷,可见染色质边集,核间可见小胶质细胞；光感受器细胞外节膜盘排列紊乱、疏松变形,并发生断裂、溶解,线粒体肿胀,空泡化明显。治疗组与模型组和对照组相比,大鼠视网膜神经节细胞间隙增大,排列尚整齐,可见核浓缩,染色质边集,可见散在分布的小胶质细胞；外核层排列整齐而紧密,细胞核电子密度均匀；光感受器细胞外节膜盘排列整齐,局部可见疏松,未见明显线粒体肿胀及空泡样改变。(4)CD68在视网膜的表达结果：与正常组相比,模型组、治疗组、对照组大鼠视网膜CD68阳性表达明显增加(P0.05)；与模型组相比,治疗组、对照组表达明显增高(P0.05)；与对照相比,治疗组表达无明显差异(P0.05)。(5) GDNF在视网膜上的表达结果,与正常组相比,模型组、治疗组、对照组大鼠视网膜GDNF表达值明显增高(P0.05)；与模型组相比,治疗组、对照组表达量明显增加(P0.05)结论：1实验性糖尿病大鼠的视网膜发生明显的病理性损害；2糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞具有一定的保护作用；3糖网1号方能抑制糖尿病大鼠视网膜小胶质细胞的活化,增强GDNF的表达,有助于减轻视网膜神经细胞的损害,促进细胞的修复与再生。第二部分针刺对外伤压迫性视神经萎缩的临床观察目的：观察针刺对外伤压迫性视神经萎缩(optic atrophy, OA)的临床疗效。方法：对45例(68眼)外伤压迫性视神经萎缩患者,与针刺治疗,观察患者治疗前与治疗后1个月、3个月、6个月的视力、视野以及治疗前与治疗6个月后的视觉诱发电位(visual evoked potential, VEP)的变化。结果：(1)视力：治疗1个月、3个月、6个月后视力与治疗前相比,均有不同程度的提高,其有效率分别为32.35%、48.43%、61.29%；(2)视野平均光敏感度(mean light sensitivity, MS)、视野平均缺损值(mean defect, MD):与治疗前相比,治疗1个月、3个月和6个月的MS均明显升高、MD值均明显增高(P0.05); (3) VEP潜伏期和振幅：与治疗前相比,治疗6个月VEP-P100波的潜伏期明显缩短(P0.05),振幅明显升高(P0.05)。结论：针刺治疗外伤压迫性视神经萎缩疗效确切,能有效改善该病患者的视力、视野、视觉诱发电位,防止视神经损害继续加重,提高患者视功能质量及生存治疗。
【关键词】：糖网1号方 糖尿病视网膜病变 神经节细胞 小胶质细胞 胶质源性神经营养因子
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R259;R276.7
【目录】：

• 摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 文献综述13-31
• 综述一 糖尿病对视网膜神经视觉传导细胞的影响13-24
• 1 视网膜色素上皮(RPE)细胞13-14
• 2 三级神经元14-16
• 2.1 第一级神经元—光感受器14
• 2.2 第二级神经元—双极细胞14-15
• 2.3 第三级神经元—视网膜神经节细胞(RGCs)15-16
• 3 视网膜神经胶质细胞16-18
• 3.1 星形胶质细胞与Muller细胞16-17
• 3.2 视网膜小胶质细胞17-18
• 4. 展望18-19
• 参考文献19-24
• 综述二 中医药治疗在改善视神经萎缩患者视觉功能方面的作用24-31
• 1 中药复方辨证辨病论治24-25
• 2 针灸治疗25-26
• 3 联合治疗26-29
• 参考文献29-31
• 第一部分 糖网1号方对糖尿病大鼠视网膜神经细胞保护作用的应用研究31-51
• 前言31-33
• 材料与方法33-38
• 1 实验材料33-34
• 1.1 实验动物33
• 1.2 药物与试剂33
• 1.3 主要仪器设备33-34
• 2 试验方法34-38
• 2.1 模型的建立及分组34
• 2.2 药物干预34
• 2.3 动态指标监测34
• 2.4 取材、标本的处理及制备34-36
• 2.5 组织观察36-37
• 2.6 统计学分析37-38
• 结果38-47
• 1 动态指标38-39
• 1.1 一般情况38
• 1.2 大鼠血糖38-39
• 1.3 大鼠体重39
• 2 大鼠视网膜组织形态学观察39-47
• 2.1 光镜下观察结果39-41
• 2.2 电镜下观察结果41-43
• 2.3 CD68和GDNF免疫组织化学法(Envision法)检测结果43-47
• 讨论47-50
• 结论50-51
• 第二部分 针刺对外伤压迫性视神经萎缩的临床观察51-60
• 前言51
• 资料与方法51-54
• 1.1 研究对象51-52
• 1.2 诊断标准52
• 1.3 纳入标准52
• 1.4 病例排除52
• 1.5 干预方法-针刺治疗52-53
• 1.6 观察指标53
• 1.7 视力疗效判断标准53
• 1.8 统计学方法53-54
• 结果54-58
• 2.1 视力54-55
• 2.2 视野55-56
• 2.3 视觉诱发电位56-58
• 讨论58-60
• 参考文献60-63
• 致谢63-65
• 个人简介65

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