三七总皂苷对大鼠急性重症胰腺炎胰腺细胞钙超载的影响

发布时间：2017-10-07 22:32

  本文关键词：三七总皂苷对大鼠急性重症胰腺炎胰腺细胞钙超载的影响

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【摘要】：[研究背景]急性重症胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)是外科中常见的急腹症。在临床工作中我们发现其病情变化迅速,各种并发症处理较为复杂,而且目前其患病死亡率较高,可高达10-20%。由于其发病机制尚不完全清楚,治疗方面十分棘手。目前对SAP的研究主要集中在胰酶自身消化、白细胞过度激活、微循环障碍、高脂血症、细菌感染这几点。随着研究程度深入及研究水平的提高,”钙超载”学说愈来愈引起人们的重视。细胞中Ca2+在细胞中起到重要作用,参与并调节各项生理功能。肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是炎症发生过程中一个重要的细胞因子。在急性重症胰腺炎的各项研究中发现,其表达量与病情的危重程度呈正相关。细胞中Ca2+的大量聚集,可以引起细胞钙超载的发生,会导致细胞功能障碍,甚至于死亡。当前,细胞损伤的的众多机制中,“钙超载被视为共同途径”。我们实验观察SAP发病过程中胰腺细胞钙超载的程度和胰腺组织内TNF-α的表达量。探索性研究”钙超载学说”和”炎症介质学说”表达是否具有相关性,即胰腺细胞内Ca2+的增加是否可以导致炎症因子的表达升高。“三七”作为云南省特色植物,是中药中最珍贵的药物之一。其提取物三七总皂苷(Panax Notoginseng Saponins, PNS)在临床多种疾病中也广为使用。针对胰腺炎治疗,PNS应用更为频繁,但是当前对于其治疗胰腺炎的机制方面仍然是停留在“炎性因子”、“氧自由基”、“微循环”等方面,但是对于“钙超载”还未有所涉及。三磷酸肌醇:(Inositol Trisphosphate, IP3)作为第二信使,参与细胞内Ca2+的调控。针对关于PNS对SAP治疗机制的影响目前在“钙超载”还未有报道,我们的课题通过检测IP3和细胞内Ca2+来探究PNS是否可以通过影响IP3的表达,来对细胞“钙超载”进行调节。旧的]本课题研究SAP时,胰腺细胞“钙超载”的程度与炎症因子TNF-α表达量的相关性；进一步探究PNS对对急性重症胰腺炎腺泡细胞钙超载的影响以及胰腺的保护作用。[方法]健康成年雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠120只,体重200-250g,随机分成三组。①假手术组(SO组)：开腹后轻轻翻动十二指肠和胰腺,关腹；②SAP组：将5%牛磺胆酸钠(1.0mL/kg)采用经肠壁逆行胰胆管注射法来诱导SAP模型。③PNS组(三七总皂苷预干预组)：在进行胰腺炎模型建模前,腹腔注射PNS(50 mg/ml血塞通注射液(0.1ml/100g)).注射后1h,按照SAP组方法建立急性重症胰腺炎模型。各组大鼠分别于术后4h、8h、12h、24h使用乙醚麻醉处死,收集腹水、血清、胰腺标本,计算腹水量。生物化学方法分别测定血清淀粉酶(AMS)活性和血清Ca2+浓度。ELISA法测定胰腺组织IP3水平。HE染色胰腺,光镜观察胰腺病理学评分。使用流式细胞仪技术(Flow Cytometry/Financal Capacity Model, FCM)检测细胞内Ca2+的荧光强度(Fluorescence Intensity, FI),通过荧光强度反应细胞内Ca2+的浓度。免疫组化S-P法检测胰腺组织内TNF-a表达量。Spearman分析细胞内Ca2+浓度与胰腺组织TNF-α表达量的相关性。[结果]1.血清淀粉酶(AMS)：三组大鼠AMS在各时间点之间是有有显著差异(P0.01),SAP组和PNS组较SO组AMS均明显升高(P0.01),而各时间点的SAP组与PNS组组间比较没有统计学差异(P0.05)。2.血清Ca2’：SAP组及PNS组在4h、8h、12h时间点上血清Ca2+浓度低于SO组,差异存在统计学意义(P0.01),而SAP组与PNS组进行比较,PNS组较高于SAP组,但是差异无显著性(P0.05)。24h时,SAP组和PNS组较高于SO组,但是差异没有统计学意义,三组间没有显著差异性(P0.05)。3.胰腺组织内IP3：SAP组、PNS组2组在各个时间IP3含量均比同时间点SO组显著增高(P0.05)。SAP组与PNS组两两比较,在4h、8h时间点两者无统计学差异(P0.05),12h和24h的IP3含量具有统计学差异,PNS组均低于SAP组(P0.05)。4.腹水量：SAP组及PNS组建模后在个时间点打开腹腔均可见大量血性腹水产生。其中前两组较SO组均有显著差异(P0.05)。在4h时,SAP组和PNS组之间差异不明显,没有统计学意义(P0.05)。这两组在8h、12h、24h比较时有显著性差异(P0.05),PNS组较SAP组腹水量明显减少。5.细胞内Ca2+荧光强度：使用荧光显微镜下观察,可见胰腺腺泡细胞内钙离子的显影,呈现绿光。通过细胞内Ca2+的荧光强度(Fluorescence Intensity,FI)来反映细胞内Ca2+的浓度大小。统计数据得出：在4h这个时间点,SAP组和PNS组均较SO组高,有统计学差异(F=103.399),但是SAP组和PNS组之间没有统计学差异(P0.05)。在8h、12h、24h三个时间点,三组大鼠细胞内Ca2+浓度之间均有统计学差异(F=334.101,288.060,296.392,P0.05)。SAP组较PNS组其细胞内Ca2+荧光强度显著升高(P0.05),具有统计学差异。6.胰腺组织病理学损伤：SAP组和PNS组病理学评分较SO组显著升高(P0.05),在4h SAP组和PNS组之间没有统计学差异(P0.05)。在8h、12h、24h三个时间点病理学评分分析可知：PNS组较SAP组均显著降低(P0.05)7.TNF-α的表达量：胰腺组织通过免疫组化处理后,在细胞质内呈现黄褐色,我们通过Image pro plus软件检测其平均光密度(Average Optical Density,AOD)通过平均观密度值反映胰腺组织内TNF-α的表达量。数据提示：在各个时间点三组的TNF-α平均观密度之间均有统计学差异(P0.05),SAP组和PNS组的平均观密度较SO组均显著升高。而在4h,8h,12h这三个时间点,PNS组较SAP组均有显著降低,两者之间均有统计学差异。8.相关性研究：应用Spearman等级相关分析和Pearson相关分析结果显示：在各时间点大鼠胰腺细胞内Ca2+浓度均与大鼠胰腺组织TNF-α表达量呈正相关性(P0.05),细胞内Ca2+浓度升高与TNF-α表达量增加有相关性。[结论]急性重症胰腺炎发病时细胞内Ca2+浓度升高,发生“钙超载”。钙超载的程度与其炎症介质TNF-α的表达呈正相关。“钙超载”在SAP发病过程中起到“触发点”作用。三七总皂苷可以通过抑制胰腺组织IP3的表达,减轻细胞内钙超载的程度,对胰腺组织起到保护作用。
【关键词】：PNS SAP 钙超载 IP_3
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285.5
【目录】：

• 缩略语表5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACTS10-15
• 前言15-17
• 材料与方法17-29
• 结果29-42
• 讨论42-54
• 结论54-55
• 参考文献55-61
• 综述61-68
• 参考文献66-68
• 硕士在读期间发表的文章68-69
• 致谢69

【参考文献】

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1 王宏志;刘俊;宋慧;李磊;侯晓华;;乌司他丁联合三七总皂甙对急性胰腺炎大鼠氧自由基的影响[J];世界华人消化杂志;2007年17期

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本文编号：990474