维吾尔族IgA肾病尿液糖基化蛋白质组学的观察研究

发布时间：2017-10-21 22:11

  本文关键词：维吾尔族IgA肾病尿液糖基化蛋白质组学的观察研究

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【摘要】：目的:研究初次诊断为维吾尔族Ig A肾病的尿液糖基化蛋白质质谱特点,并与维吾尔族健康人尿液糖基化蛋白质谱进行对比,观察维吾尔族Ig A肾病中差异表达的蛋白质,探讨液质联用技术对该疾病的临床诊断价值。方法:选择2013年12月至2014年8月期间经肾活检诊断为原发性Ig A肾病的维吾尔族患者20例及同期体检的健康人10例,留取清晨空腹清洁中段尿标本,并立即加入盐酸防腐。为避免细菌污染和蛋白酶解于2小时内在4℃下以4000g×10min离心去除细胞碎片及相关成分,留取上清液,置于-80℃冰箱保存备用。随后取出30份尿标本,待常温下完全溶解后,按照标本体积:丙酮体积为3:1的比例迅速加入-20℃预冷丙酮进行蛋白沉淀,将样品再次以4℃14000g×30min离心沉淀,丢弃上清液,将含尿液蛋白质的沉淀物真空干燥浓缩并存于-80℃中待用。将真空干燥后的尿蛋白沉淀物用PBS溶液充分溶解后,用Bradford法测定每份样品中尿蛋白浓度。应用肼化学富集糖蛋白后PNGase F去糖链酶切,真空离心干燥后进行二维液相色谱串联质谱技术对样品进行系统分析。所获得的蛋白质多肽序列结果应用Mascot软件进行数据检索,将获得的尿蛋白序列号在Uniprot数据库中进行检索,查询所表达的蛋白质名称、分子质量、细胞学定位、等电点等相关信息。结果:1.10份维吾尔族健康人的尿液标本中共鉴定出121种糖蛋白,经验证后,所有健康人的尿液标本共同表达23种蛋白质。2.20份维吾尔族Ig A肾病患者的尿液标本中共鉴定出218种糖蛋白,所有标本共同表达17种蛋白质,与健康人尿液表达的蛋白质进行分析比较,在Ig A肾病中特异性表达6种蛋白,它们分别是:α-1抗胰蛋白酶、铜蓝蛋白、血清转铁蛋白、维生素D结合蛋白、α1-微球蛋白、α淀粉酶1。结论:本实验利用二维液相色谱串联质谱技术研究了维吾尔族Ig A肾病患者的尿液糖基化蛋白质谱特点,成功获得了该疾病的多肽序列质谱图,共得到218种糖蛋白。其中α-1抗胰蛋白酶、铜蓝蛋白、血清转铁蛋白、维生素D结合蛋白、α1-微球蛋白、α淀粉酶1,这6种蛋白可能成为维吾尔族lg A肾病的诊断标志物。
【关键词】：维吾尔族 IgA肾病 糖蛋白质组学 液质联用技术
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692.3
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-9
• 英文缩略词表9-10
• 引言10-12
• 材料与方法12-16
• （一）研究对象12
• 1.病例组入组标准12
• 2.对照组入组标准12
• 3.标本的采集12
• （二）实验材料12-13
• 1.试剂12-13
• 2.仪器设备13
• 3.相关辅料13
• （三）实验步骤13-15
• 1.标本采集13
• 2.标本处理13-14
• 3.数据分析14-15
• （四）技术路线图15-16
• 结果16-22
• 1.两组入选者的临床资料16
• 2.健康对照组结果16-18
• 3.IgA肾病组结果18-19
• 4.质谱图19-22
• 讨论22-26
• 小结与瞻望26-27
• 结论27-28
• 参考文献28-32
• 文献综述32-45
• 参考文献41-45
• 致谢45-46
• 作者简历46-47
• 导师评阅表47

【参考文献】

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1 贾雄飞;贺伟峰;罗高兴;甘成军;黄正根;袁顺宗;王小娟;彭旭;程文广;谭江琳;胡婕;吴军;;肾移植急性排斥反应早期诊断尿液蛋白质组学研究[J];第三军医大学学报;2008年24期

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3 周华;赵静芳;孙彬;钱军;赵秀芬;潘家荣;邢昌赢;;临床轻症IgA肾病尿蛋白质组学研究[J];中国实用内科杂志;2010年10期

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本文编号：1075452