益气养阴法对IgA肾病大鼠肾脏组织中肿瘤坏死因子及α-平滑肌动蛋白表达的影响

发布时间：2018-01-28 07:06

  本文关键词： 益气养阴法 IgA肾病 大鼠模型 α-SMA TNF-α 肾脏纤维化　出处：《河北医科大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：IgA肾病（IgA nephropathy,IgAN）又称Berger病。是肾脏免疫病理检查中IgA或以IgA为主的免疫复合物在肾小球系膜区、毛细血管袢沉积的一类原发性肾小球疾病。本实验通过复制IgA肾病大鼠模型，并予相应的益气养阴中药物进行干预治疗以研究益气养阴法对IgA肾病的治疗作用及可能作用机制，为临床实验和治疗提供理论依据及实验基础。 方法：依据汤颖等的造模方法，对Sprague-Dauley(SD)大鼠进行IgA肾病模型复制：150g左右的SD大鼠随机分为正常组、模型组、贝那普利组、益气养阴组，用牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）灌胃八周，0.3ml蓖麻油+0.1ml四氯化碳（Carbom tetrachloride,CCl4）皮下注射九周，并在第7周末尾静脉注射脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）；正常组分别予纯净水灌胃、生理盐水皮下注射、尾静脉注射。益气养阴组大鼠益气养阴中药物进行灌胃，贝那普利组大鼠予贝那普利混悬液进行灌胃，正常组、模型组予等量纯净水灌胃，持续8周。于模型复制前尿蛋白试纸测定尿蛋白、第4、7、10、14、18周末测定24小时尿蛋白定量、尿红细胞计数。第18周末断头取血，血清分离，检测血清中血尿素氮（Bloodurea nitrogen,BUN）、血清肌酐（Serum creatinine，Scr），留取肾脏组织，行HE、PAS、Masson、Jones银染色光镜检查及免疫荧光检查，免疫组化法测定模型大鼠肾脏组织中α-平滑肌动蛋白（α-smooth muscleactin, α-SMA）、肿瘤坏死因子α(Tumour necrosis factor-α，TNF-α)的表达情况。 结果： 1大鼠一般情况： 正常组：一般情况良好，毛色光亮，肌肉丰满，精神正常，正常饮食、反应敏捷 模型组、贝那普利组、益气养阴组：实验初情况同正常组，模型复制开始后被毛杂乱，毛色逐渐无光，消瘦，反应迟缓，尾静脉注射脂多糖后，一只老鼠当即死亡（贝那普利组，原因不详，考虑按压老鼠力气过大或注射器中进入空气），第一天死亡1只（模型组），第三天死亡1只（贝那普利组），三组老鼠均不欲饮食，另有2只（模型组、贝那普利组）第二天鼻眼部出现流血精神萎靡，一周后情况好转。贝那普利组、益气养阴组治疗后精神、毛色、饮食较模型组好转。死亡老鼠剔除。 2同一时期不同组大鼠尿蛋白定量的比较： 模型复制前：正常组、模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠四组大鼠的尿蛋白定量均为阴性（只做定性分析，未予统计）。 第4周末：正常组、模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠尿蛋白无明显差异(P0.05)。 第7周末：与正常组的蛋白定量进行比较，模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠尿蛋白明显升高(P0.05)；模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠各组间比较无显著性差异（P0.05）。 第10周末：与正常组相比，模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠尿蛋白明显升高(P0.05)；模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠各组间比较无显著性差异（P0.05）。 第14周末：与正常组相比，模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠尿蛋白明显升高（P0.05)；与模型组相比，贝那普利组、益气养阴组大鼠尿蛋白明显降低(P0.05)；贝那普利组、益气养阴组大鼠尿蛋白比较，无明显差异(P0.05)。 第18周末：与正常组相比，模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠尿蛋白明显升高（P0.05)；与模型组相比，贝那普利组、益气养阴组大鼠尿蛋白明显降低(P0.05)；贝那普利组、益气养阴组大鼠尿蛋白比较，无明显差异(P0.05)。 3同一时期不同组大鼠尿红细胞计数的比较： 第4周末：正常组、模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠尿红细胞计数无明显差异(P0.05)。 第7周末：与正常组的尿红细胞计数进行比较，模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠尿红细胞计数明显升高(P0.05)；模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠各组间尿红细胞计数比较无显著性差异（P0.05）。 第10周末：与正常组相比，，模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠尿红细胞计数明显升高(P0.05)；模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠各组间尿红细胞计数比较无显著性差异（P0.05）。 第14周末：与正常组相比，模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠尿红细胞计数明显升高（P0.05)；与模型组相比，贝那普利组大鼠尿红细胞计数有所降低，但比较无统计学意义（P0.05）；与模型组相比，益气养阴组大鼠尿红细胞计数降低，比较有统计学意义（P0.05）。 第18周末：与正常组相比，模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠尿红细胞计数明显升高（P0.05)；与模型组相比，贝那普利组大鼠尿红细胞计数有所降低，但比较无统计学意义（P0.05）；与模型组相比，益气养阴组大鼠尿红细胞计数降低，比较有统计学意义（P0.05）。 4IgA肾病大鼠Scr、BUN的比较： 正常组、模型组、贝那普利组、益气养阴组血清Scr、BUN各组间差异不明显(P0.05)。 5肾脏病理形态学观察： 5.1光镜：正常组：肾小球结构完整，系膜、基质无明显异常改变。模型组：肾小球结构完整，系膜细胞增生，系膜基质增多，毛细血管、肾小管基底膜见不同程度增厚，或伴肾小管萎缩。 贝那普利组、益气养阴组：肾小球结构完整，系膜细胞增生，系膜基质增多，偶尔可见肾小管的萎缩，均较模型组病变减轻。 5.2免疫荧光： 正常组：肾小球系膜区未见或少见IgA免疫复合物沉积。 模型组：肾小球系膜区可见IgA免疫复合物沿肾小球系膜团块状分布。 贝那普利组、益气养阴组：肾小球系膜区可见不同程度IgA免疫复合物沿肾小球系膜团块状分布，较模型组减轻。 6免疫组化法测定α-SMA、TNF-α在肾脏组织的表达： 6.1大鼠肾脏组织α-SMA蛋白的表达 与正常组比较，模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠肾脏组织中α-SMA的阳性表达增强(P0.05)；与模型组相比，贝那普利组、益气养阴组大鼠肾脏组织中α-SMA的阳性表达减弱(P0.05)。 6.2大鼠肾脏组织TNF-α蛋白的表达 与正常组比较，模型组、贝那普利组、益气养阴组大鼠肾脏组织中TNF-α的阳性表达增强(P0.05)；与模型组相比，贝那普利组、益气养阴组大鼠肾脏组织中TNF-α的阳性表达减弱(P0.05)。 结论： 1益气养阴中药能明显降低IgA肾病大鼠的尿蛋白、尿红细胞计数，进而保护肾功能； 2益气养阴中药能降低IgA肾病大鼠肾组织的病理损伤，延缓IgA肾病的进展； 3益气养阴中药可能通过降低α-SMA、TNF-α在IgA肾病大鼠肾脏组织的表达，进而防止肾小球硬化、肾间质纤维化、降低炎症反应，从而延缓肾脏病的发展。
[Abstract]:Objective: IgA nephropathy (IgA nephropathy IgAN) is also called Berger disease. Kidney immune pathological examination of IgA or IgA as immune complexes in the mesangial area, a kind of capillary deposition of primary glomerular diseases. Through this experiment, copy the model of IgA nephropathy rats, and were treated with research supplementing qi and nourishing Yin on IgA nephropathy treatment effect and the possible mechanism for medicine in the Qi and Yin, the theoretical and experimental basis for clinical and experimental treatment.
Methods: Based on the model of Tang Ying, Sprague-Dauley (SD) on rat IgA nephropathy model replication: SD rats were randomly divided into normal group 150g, model group, Benner Pury group, Yiqi Yangyin group, with bovine serum albumin (Bovine serum, albumin, BSA) by gavage for eight weeks, 0.3ml of castor oil +0.1ml (Carbom tetrachloride CCl4) by subcutaneous injection for nine weeks, and at the end of the seventh week intravenous injection of lipopolysaccharide (Lipopolysaccharide, LPS); the normal group were treated with pure water gavage, subcutaneous injection of normal saline, intravenous injection of drugs. In rats of Supplementing Qi and nourishing Yin, invigorating qi and Nourishing Yin by intragastric administration, rats were given the Benner Pury Benner Pury mixed suspension gavage, the normal group and model group were given pure water gavage for 8 weeks. In the model of urinary protein determination before albustix, 4,7,10,14,18 weekend 24 hours urinary protein quantitative determination, urine red blood cell count. At the end of the eighteenth broken blood, serum separation, detection of serum blood urea nitrogen (Bloodurea, nitrogen, BUN), serum creatinine (Serum creatinine, Scr), left kidney tissues were collected, HE, PAS, Masson, Jones silver staining by light microscopy and immunofluorescence examination, immunohistochemical determination of kidney tissue of rats alpha smooth muscle actin (-smooth alpha muscleactin, alpha -SMA), tumor necrosis factor alpha (Tumour alpha factor- alpha necrosis, TNF-) expression.
Result锛

本文编号：1470120