HSPC111基因表达与前列腺癌放射敏感性关系的研究

发布时间：2018-03-27 11:35

  本文选题：前列腺癌　切入点：生物学行为　出处：《天津医科大学》2017年博士论文

【摘要】：目的:明确HSPC111在前列腺癌中的表达情况以及其对前列腺癌PC3细胞体外生物学行为的影响,探讨HSPC111对前列腺癌进展的影响。进一步研究下调HSPC111的表达水平对前列腺癌PC3细胞放射敏感性的影响并探究其机制。方法:运用Western Blot及RT qPCR方法检测HSPC111在前列腺癌组织、前列腺增生组织中的表达水平,以及在前列腺癌PC3细胞系、前列腺RWPE 1细胞系中的表达量;使用HSPC111 shRNA慢病毒,转染前列腺癌PC3细胞,筛选HSPC111低表达的前列腺癌PC3细胞系,然后分别从mRNA及蛋白表达水平验证转染后前列腺癌PC3细胞中HSPC111的表达情况;运用MTT法检测降低HSPC111的表达后是否对前列腺癌细胞体外增殖能力产生影响;利用Transwell法检测降低HSPC111的表达是否对前列腺癌PC3细胞体外侵袭能力产生影响;流式细胞仪检测降低HSPC111的表达是否对PC3细胞的凋亡及细胞周期产生影响;克隆形成实验检测HSPC111低表达对PC3细胞放射敏感性的影响;体内试验验证HSPC111对荷瘤裸鼠肿瘤放疗敏感性的影响;流式细胞术检测HSPC111对PC3细胞放疗后细胞周期分布及凋亡的影响;Western blot检测HSPC111对PC3细胞放疗后γ H2AX表达水平的影响;Western blot检测HSPC111对PC3细胞放疗后凋亡及DNA修复相关蛋白表达水平的影响。采用SPSS 18.0软件对所有实验数据进行统计学分析。结果:HSPC111在前列腺癌组织中表达增加;HSPC111前列腺癌细胞系PC3中的表达高于在前列腺细胞系RWPE 1中的表达;对PC3细胞使用含HSPC111特异性慢病毒载体进行转染,可降低PC3细胞HSPC111的表达水平;体外细胞生物学行为检测发现,下调HSPC111表达水平可以使前列腺癌PC3细胞的体外增殖能力明显下降;可使前列腺癌PC3细胞的体外侵袭能力明显降低;可使前列腺癌PC3细胞的凋亡能力增加;可使PC3细胞阻滞在G0/G1期,减少细胞的DNA复制,从而影响细胞的增殖。对细胞进行克隆形成实验,结果显示,给予不同剂量(0、2、4、6、8Gy)X线照射后,和Vector组细胞相比,下调HSPC111表达的PC3细胞其存活曲线下降幅度明显增加,其SF2、D0和N值也均明显下降(P0.05),总体的放射增敏比为2.22(D0值之比)。照射后对PC3细胞进行更深入的研究发现,X线照射可使前列腺癌PC3细胞的细胞周期阻滞在G2/M期,增加PC3细胞的凋亡;并引起与细胞凋亡相关的蛋白Caspase 8以及抗凋亡蛋白Bcl 2的表达增加;DNA损伤标记物γ H2AX以及DNA损伤修复蛋白Ku80表达增多。而下调HSPC111的表达可减少放射引起的PC3细胞的G2/M期阻滞(P0.05);促进放射引起的凋亡增加(P0.05);促进放射引起凋亡蛋白Caspase-8的表达增加(P0.05);抑制放射引起的抗凋亡蛋白Bcl-2增加;抑制放射引起的Ku80蛋白的表达增加(P0.05),促进DNA损伤标记物γ-H2AX的表达增加。体内试验显示无论是肿瘤缩减率实验还是肿瘤生长曲线实验均表明HSPC111低表达可以增加裸鼠肿瘤组织的放疗敏感性。结论:HSPC111在前列腺癌中高表达,降低HSPC111的表达可降低pc3细胞的增殖,促进其凋亡,降低其侵袭能力。我们认为降低HSPC111表达可以抑制前列腺癌的进展。下调HSPC111的表达可增强前列腺癌PC3细胞对放射治疗的敏感性。裸鼠体内成瘤实验进一步证实HSPC111协同射线治疗能有效的抑制PC3细胞生长及成瘤能力。其机理可能是影响细胞的周期和凋亡,调控凋亡相关蛋白及DNA损伤修复蛋白的表达,从而减少放射诱导的G2/M期阻滞,降低DNA损伤修复能力,增加细胞凋亡有关。
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本文编号：1671346