IgA肾病患者可溶性尿激酶受体水平与FSGS样病理损伤的临床和基础研究

发布时间：2018-04-01 02:21

  本文选题：可溶性尿激酶受体　切入点：局部节段性肾小球硬化　出处：《华中科技大学》2016年博士论文

【摘要】：第一部分IgA肾病患者血浆可溶性尿激酶受体水平与局部节段性肾小球硬化样病理改变发生相关[目的]已有研究报道可溶性尿激酶受体(soluble urokinase receptor, suPAR)与局部节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis, FSGS)的病理发生可能相关。本研究将分析suPAR是否参与1gA肾病患者的FSGS样病理改变。[方法]检测138例IgA肾病患者血浆suPAR水平,然后分析它们的临床及病理相关性。[结果]我们发现无论是通过单变量分析还是多变量分析IgA肾病患者血浆suPAR值均与年龄和肾功能显著性相关。通过多变量分析发现,女性血浆suPAR水平更高,血浆suPAR水平与患者IgA肾病患者24小时尿蛋白水平和血浆超敏C反应蛋白之间没有显著的相关性。在我们的1gA肾病患者队列中,60例患者病理切片中包含FSGS样病理改变。通过单变量和多变量分析发现,与不伴FSGS样病理改变的IgA肾病患者相比,伴FSGS样病理改变的IgA肾病患者有着显著升高的血浆suPAR水平。血浆suPAR值也可以成为区分IgA肾病患者是否伴有FSGS改变的有效因子。最佳的分界值为1806 pg/ml。同样无论单变量分析还是多变量分析我们都发现血浆suPAR浓度均与肾小管萎缩/间质纤维化程度显著性相关。多变量分析中,血浆suPAR水平与肾小球新月体形成百分比显著相关,与肾小球球性硬化百分比和动脉损伤程度无关。[结论]该研究的结果表明IgA肾病患者血浆suPAR水平显著性相关于年龄,性别,肾功能,肾小球萎缩/间质纤维化程度和新月体形成百分比。在中国IgA肾病患者中,血浆suPAR可能是判断FSGS样病理改变是否存在的潜在预测因子。第二部分尿激酶受体蛋白提高小鼠原代足突细胞运动能力的研究[目的]根据我们前期研究循环suPAR水平与IgA肾病患者FSGS样病理改变相关的结果,继续明确uPAR蛋白对足细胞的影响。[方法]应用免疫荧光及流式细胞学技术鉴定所提取小鼠原代足突细胞的纯度。运用划痕实验及迁移实验检测uPAR蛋白对小鼠原代足细胞运动能力的影响。并且,运用western blot技术检测各实验组原代足细胞运动相关蛋白的表达。[结果]所提小鼠原代足细胞均高表达足细胞特异蛋白Nephrin、Synaptopodin及WT-1,流式细胞仪检测细胞纯度为98.4%。划痕实验结果发现,与正常对照组相比,10μg/ml uPAR重组蛋白显著性增强小鼠原代足细胞24小时及48小时内的运动能力(P0.05)。迁移实验结果表明,与正常对照组相比,5μg/ml(P0.05)及10μg/ml(P0.01)uPAR重组蛋白均显著性增强小鼠原代足细胞24小时及48小时内的迁移能力。同时,10μg/ml uPAR蛋白可显著性增加原代足细胞RhoA、Rac1及Cdc42蛋白水平的表达,并且可显著性降低其Nephrin蛋白水平的表达。[结论]通过对RhoA、Rac1及Cdc42蛋白水平表达的调节,uPAR蛋白可以促进小鼠原代足细胞运动能力的增强。第三部分尿激酶受体在不同环境下影响小鼠系膜细胞增殖能力的研究[目的]肾小球系膜细胞增生,凋亡及细胞外基质沉积是多种肾脏疾病中常见的病理改变。尿激酶受体是一种多功能胞膜外蛋白,具有促进或抑制细胞增殖的多重作用。本研究将明确尿激酶受体对于肾小球系膜细胞的具体作用。[方法]运用MTT及Brdu方法分别于正常、高糖或血清饥饿培养条件下分析uPAR重组蛋白对小鼠系膜细胞增殖能力的影响。应用Western blot实验技术检测不同处理组系膜细胞增殖相关蛋白的表达情况,包括AKT、P-AKT、MEK、P-MEK、ERK及P-ERK蛋白的表达。同样运用MTT技术分析整合素抑制肽RGD对各组细胞增殖能力的影响。[结果]5μg/ml及10μg/ml浓度水平uPAR显著性降低正常培养小鼠系膜细胞24小时及48小时内的增殖能力。与正常对照组相比,高糖及血清饥饿处理24小时或48小时内均导致系膜细胞增殖能力显著性降低。uPAR重组蛋白的干预显著促进高糖环境下小鼠系膜细胞增殖能力抑制水平。相反,uPAR重组蛋白的干预促进血清饥饿环境下小鼠系膜细胞的增殖水平。10μg/ml浓度的uPAR蛋白作用最为显著。与此相对应,与单纯高糖处理组相比,10μg/ml uPAR重组蛋白显著性降低高糖处理小鼠系膜细胞P-AKT、MEK、P-MEK及P-ERK蛋白表达水平。相反,与单纯血清饥饿处理组相比,10μg/ml uPAR重组蛋白显著性提高血清饥饿处理小鼠系膜细胞P-AKT、MEK、 P-MEK及P-ERK蛋白表达水平。AKT及ERK蛋白表达水平均没有发生显著性改变。整合素抑制肽RGD可以显著性降低uPAR重组蛋白对血清饥饿环境下小鼠系膜细胞的促增殖能力(P0.05)。然而,对uPAR重组蛋白促进高糖环境下小鼠系膜细胞增殖抑制过程,RGD没有显著性拮抗作用。[结论]通过对P-AKT、MEK、P-MEK及P-ERK蛋白表达的不同调节,uPAR对高糖环境下系膜细胞具有抑制增殖作用,而对血清饥饿环境下系膜细胞具有促进增殖作用。uPAR的促进血清饥饿培养条件下小鼠系膜细胞增殖的过程需要整合素蛋白的参与。第四部分uPAR蛋白与补体系统激活相互作用性研究[目的]前期研究表明补体通路的激活及血浆suPAR水平均与IgA肾病患者FSGS样病理改变相关,本研究将观察补体系统的激活与suPAR的表达是否相关。[方法]检测210例IgA肾病患者血浆suPAR水平,并与患者肾小球系膜区C3沉积行相关性分析。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测小鼠系膜细胞及原代足细胞C3aR及C5aR mRNA表达。运用Western blot技术分析不同浓度uPAR蛋白对小鼠系膜细胞及原代足细胞C3aR及C5aR蛋白表达的影响,及不同浓度C3a及C5a蛋白对小鼠系膜细胞及原代足细胞uPAR蛋白表达的影响。[结果]肾小球系膜区补体C3沉积3+～4+的IgA肾病患者血浆suPAR浓度显著性高于C3沉积2+IgA肾病患者血浆suPAR水平(P0.001)及C3沉积0～1+的IgA肾病患者血浆suPAR水平(P0.0001)。小鼠系膜细胞及原代足细胞均有C3aR及C5aRmRAN表达。与正常对照组相比,uPAR蛋白可以显著性增加小鼠系膜细胞及原代足细胞C3aR及C5aR蛋白的表达,且呈剂量依赖性。反过来,补体C3a及C5a也可显著性增加小鼠系膜细胞及原代足细胞uPAR蛋白水平的表达,也呈剂量依赖性。[结论]在肾脏疾病系统中,uPAR蛋白的表达与补体系统的激活可能存在相互作用的关系。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692.31

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 章道恒,肖克峰,江洪涛,房杰群;人系膜细胞中组织金属蛋白酶抑制剂1基因的稳定表达[J];中国现代医学杂志;2004年06期

2 王远程,叶志斌,周钦,张宗梁,吴兆龙;丙丁酚抑制氧化型低密度脂蛋白诱导系膜细胞转化生长因子-β_1表达[J];复旦学报(医学版);2005年02期

3 朱晓雷;;中药及有效成分对系膜细胞作用的研究进展[J];江西中医药;2006年10期

4 段惠军;李英;张涛;刘茂东;史永红;;高糖对系膜细胞胞外调节蛋白激酶表达及细胞外基质合成的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2008年01期

5 夏志银,宫崎正信,阿部,河野茂,吉雄扬子,西野友战,范亚平,蒋季杰;系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白表达与细胞表型的关系[J];南通医学院学报;2002年02期

6 陈玲;贾汝汉;邱昌建;丁国华;;脱氢抗坏血酸对高糖诱导系膜细胞产生氧自由基的影响[J];中华肾脏病杂志;2006年09期

7 许钟镐;孙晶;贾冶;苗里宁;;12-脂氧化酶对系膜细胞血管紧张素Ⅱ1型受体表达的影响[J];中华肾脏病杂志;2006年10期

8 胡伟新;黎磊石;庄一义;;大黄及低密度脂蛋白对系膜细胞生长的影响[J];金陵医院学报;1993年01期

9 朱晓玲,王永钧,程晓霞,童孟立,陈洪宇,张满生;尿毒净Ⅱ号对人肾系膜细胞Cyclin D_1及CDK_4表达的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2004年06期

10 姚兰;陈海平;张丽;唐淑珍;;肝细胞生长因子对高糖条件下系膜细胞基质降解酶系统及转化生长因子β1的影响[J];首都医科大学学报;2008年03期

相关会议论文 前10条

1 刘海英;关广聚;柳刚;文蓉珠;张艳;陈兵;李学刚;;高糖对系膜细胞过氧化物酶体增殖物激活受体家族表达的影响[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年

2 袁军;贾汝汉;包艳;;螺内酯对系膜细胞合成纤溶酶原激活剂抑制物-1的影响[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年

3 张怡;黄国良;;高糖诱导系膜细胞表达TNF-a的机制探讨[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年

4 张怡;黄国良;;高糖对系膜细胞表达IL-6的影响及其机制探讨[A];中华医学会第十次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2011年

5 吴兆龙;王远程;叶志斌;;丙丁酚抑制氧化型低密度脂蛋白诱导系膜细胞转化生长因子β_1表达[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年

6 姜宗培;徐知延;张海燕;余学清;;H_2O_2介导高糖诱导的系膜细胞纤维蛋白溶酶系统变化[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年

7 吴慧娟;王小刚;刘晔;赵仲华;冯秀艳;王慧君;张志刚;;系膜细胞的饰胶蛋白聚糖泛素化调节的研究[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年

8 张庆红;丁国华;张建鄂;白寿军;罗昌霞;肖厚勤;;COX-2抑制剂对高糖诱导系膜细胞CT-GF表达的影响[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会论文集[C];2006年

9 毛山山;张农;;IL-1b诱导人系膜细胞表达NGALR[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年

10 刘铜华;吕仁和;黄启福;高彦彬;;止消通脉宁对高糖培养的系膜细胞合成胶原的影响[A];糖尿病（消渴病）中医诊治荟萃——全国第五次中医糖尿病学术大会论文集[C];1999年

相关博士学位论文 前10条

1 郭水明;IgA肾病患者可溶性尿激酶受体水平与FSGS样病理损伤的临床和基础研究[D];华中科技大学;2016年

2 江颖娟;Exendin-4对高糖条件下大鼠系膜细胞的保护作用及其机制初探[D];南方医科大学;2013年

3 李静;脂蛋白脂酶在人系膜细胞摄取极低密度脂蛋白中作用的探讨[D];中国协和医科大学;2008年

4 吴元俊;白细胞介素-10在人类肾小球疾病肾组织中的表达及其对系膜细胞的作用和机制探讨[D];南京医科大学;2002年

5 周素娴;高糖高脂环境下PAF在内皮细胞与系膜细胞相互关系中作用的研究[D];中南大学;2009年

6 兰洋;NF-κB调控氧化LDL激活系膜细胞TGF-β1转录的研究[D];复旦大学;2004年

7 张爱华;白细胞介素-13拮抗肾小球系膜细胞炎症效应及其信号转导机制的研究[D];南京医科大学;2001年

8 刘洁;Megsin及p38MAPK信号通路在糖尿病肾病发病机制中的作用[D];河北医科大学;2010年

9 孙敏;高血糖—糖化氧化—系膜细胞肥大和基质积聚与糖尿病肾病及其高血糖记忆的细胞病理学关系的研究[D];南京中医药大学;2004年

10 李学刚;高糖对人系膜细胞CTGF及其受体LRP表达的影响[D];山东大学;2011年

相关硕士学位论文 前10条

1 赵芳;丙泊酚对脂多糖诱导的小鼠肾小球系膜细胞的影响[D];华北理工大学;2016年

2 仇芝;内质网应激在前列腺素E2受体1、3亚型参与TGF-β1诱导的肾脏纤维化过程中的作用[D];南通大学;2015年

3 杨丽铃;甲基双加氧酶2在高糖刺激肾小球系膜细胞TGF-β1表达中的作用研究[D];第三军医大学;2016年

4 周书琴;重组人红细胞生成素影响系膜细胞生长与纤维连接蛋白表达的实验研究[D];南京医科大学;2008年

5 刘友霞;大黄素对高糖环境下系膜细胞收缩功能的影响[D];山东大学;2011年

6 陈建平;活性维生素D_3及其受体对人系膜细胞中mTOR蛋白表达的影响[D];石河子大学;2014年

7 封晓娟;HMGB1对小鼠系膜细胞细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响[D];河北医科大学;2011年

8 张月娟;醛糖还原酶（AR）对TGF-β1诱导人系膜细胞（HMC）表达Fibronectin和CollagenIV的影响及机制研究[D];复旦大学;2009年

9 杜娟;JNK信号通路在转化生长因子-β诱导系膜细胞外纤维连接蛋白合成中的作用[D];中国医科大学;2006年

10 贾丽艳;megsin对糖尿病小鼠肾组织P27表达的影响[D];河北医科大学;2009年

，

本文编号：1693548