Ⅰ靶向抑制Notch1信号通路对人喉癌干细胞化疗增敏的研究 ⅡGP73调控的溶瘤腺病毒GD55对前列腺癌干细胞杀伤效果

发布时间：2018-04-14 18:44

本文选题：肿瘤干细胞 + Notch1信号通路　；参考：《浙江理工大学》2017年硕士论文

【摘要】：Ⅰ.喉鳞状细胞癌,常发生于人体肿瘤中,发病率和病死率极高,严重危害着人类健康。随着蛋白质组学、分子医学等技术的发展,与LSCC发生发展相关的许多靶点和信号通路(TP53、Notch信号通路等)被发现。在靶向LSCC特异的突变位点和信号通路的研究上,也取得了一定的治疗效果。化疗药物顺铂在减少喉癌远处转移、提高患者生存率、保护器官功能方面至关重要。靶向性或选择性杀伤肿瘤干细胞,有望提高化放疗敏感性,减少癌症转移及复发。本课题通过体外悬浮培养类喉癌干细胞,并利用分子克隆构建载体pKC-Notch1和pLK0.1-shRNA载体,包装慢病毒后感染喉癌细胞,然后筛选出Notch1信号沉默和Notch1信号过表达的喉癌细胞株Hep2~(Notch1+),Hep2~(~(Notch1-))。用细胞计数法、Q-PCR、Weastern blot等实验方法检测上述细胞相关因子的表达和细胞周期等生物学特性。MTT实验以及流式分析化疗药物顺铂对Hep2~(WT),Hep2~(Notch1+),Hep2~(~(Notch1-))的杀伤效果。运用克隆形成实验和细胞计数法检测得到类喉癌干细胞增殖能力弱,多处于静息状态G0-G1期。Q-PCR和RT-PCR结果显示在类喉癌干细胞中,CD44、ALDH、p-AKT、bcl2和p21表达显著上调,而Notch1、bax和AKT下调;进一步运用western blot方法证实:在Hep2~(sphere)细胞中p-AKT、bcl2和p21蛋白表达表达显著上调,Bax和AKT蛋白表达下调。Notch1信号沉默后,细胞增殖速度加快,AKT蛋白,促凋亡蛋白Bax下调,同时p21蛋白表达也减少。在用化疗药物顺铂处理后,细胞存活率相较野生型喉癌细胞更高。相反,Notch1信号过表达的喉癌细胞,细胞增殖速度明显下降,促凋亡蛋白Bax表达增加,AKT蛋白和抑癌蛋白P21表达量也上升。在相同浓度DDP处理后,细胞存活率明显低于Hep2~(WT),Hep2~(Notch1-)细胞。结果说明悬浮培养的类喉癌干细胞具有喉癌干细胞特性。并且阿司匹林(Aspirin)和腺病毒ZD55-TRAIL对类喉癌干细胞具有较强杀伤效果而对分化的喉癌细胞影响较弱;DDP、DOX和5-Fu则相反。Noch1信号在喉癌细胞表现出抑制喉癌细胞增殖,促进Hep2细胞凋亡的特性,并且促进p21信号表达,启动抑癌机制,使细胞更多地停留在G1期。同时,Notch1信号的过表达促进了化疗药物顺铂对喉癌细胞的杀伤作用。而阻断Notch1信号通路,会促进喉癌细胞增殖,减少凋亡,并且增强喉癌细胞对DDP的耐药性。由此可见,Notch1信号在喉癌中起抑癌作用。Ⅱ.前列腺癌已成为危害男性健康的最大问题之一。与其他肿瘤相比,前列腺癌具有更明显的肿瘤异质性,从而很大程度影响了肿瘤的诊断、治疗以及预后监测。因此,对前列腺癌的研究治疗变得尤为重要。溶瘤病毒能够在不损伤正常细胞的情况下,特异性感染和裂解肿瘤细胞。随着人们对基因和癌症的深入研究,现代生物技术得道逐渐完善,治疗癌症的新型药物和方法不断更新,有些甚至已经应用于临床研究。溶瘤病毒作为抗肿瘤药物的关键在于提高其靶向性和溶瘤效应。目前,开发了一种新型的GP73调控的溶瘤腺病毒GD55靶向前列腺癌、肝癌等,并表现出明显的细胞毒性作用。本课题利用悬浮培养物来丰富类前列腺癌干细胞,通过MTT、Q-PCR和Western blot等实验方法检测GD55在前列腺癌干细胞自我更新,分化,细胞周期,耐药性和致瘤性中的性质。结果表明相比普通溶瘤病毒ZD55,GD55可以显著引起类前列腺癌干细胞的凋亡,并表现出更强的溶瘤作用。并且,GD55可以更强地抑制类前列腺癌干细胞的生长。此外,GD55可以在体外和体内显著诱导类前列腺癌干细胞的凋亡,并抑制异种移植肿瘤组织中细胞的传播和血管生成。因此,GD55可能实际上代表一种有吸引力的治疗剂,用于靶向类前列腺癌干细胞,以实现前列腺癌患者的更好的临床结果。
[Abstract]:The results showed that the expression of CD44 , ALDH , p53 and p21 in human laryngeal cancer cells were significantly higher than those of wild type laryngeal cancer cells . The results showed that the proliferation of human prostate cancer stem cells and the inhibition of proliferation of human prostate cancer stem cells were promoted by MTT , Q - PCR and Western blot .

【学位授予单位】：浙江理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.65;R737.25

【参考文献】