去肾交感神经对肾脏缺血再灌注的作用以及对心肌的影响

发布时间：2019-08-06 10:00

【摘要】：目的:既往个别研究探讨了肾脏交感神经与肾脏缺血再灌注损伤的相互联系,但结果不一,有待进一步研究证实。本研究拟建立去肾交感神经大鼠模型,研究去肾交感神经对肾脏缺血再灌注损伤的作用,并初步探讨对心脏的影响。方法:选择雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(体重200-280g)为研究对象,分为正常组(N组)、假手术组(Sham组)、去肾交感神经组(renal sympathetic denervation group,RSD组)、缺血再灌注组(ischemia-reperfusion group,I/R组)、去肾交感神经+缺血再灌注组(R+I组),其中RSD组根据去肾交感神经后时间点分为24小时组(R1组)、48小时组(R2组)和72小时组(R3组)。Sham组仅分离肾脏血管,RSD组分离双肾动静脉后用无菌棉纱蘸溶于10%苯酚无水乙醇溶液包裹双肾动脉20分钟,I/R组分离双肾动静脉后用无创动脉夹夹闭双肾动脉45分钟后松开,R+I组则根据R1组、R2组和R3组的去甲肾上腺素水平判断去肾交感神经成功后时间再开始I/R。除N组直接开腹留取动物标本外,其余组均在术后24小时留取动物标本进行分子生物学及组织学研究。(1)通过全自动生化仪测定血肌酐、尿素氮、胱抑素c水平,elisa法测定血浆中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,ngal),以及肾脏he染色以判断肾脏功能及损伤状况;通过全自动生化仪测定血浆的肌酸激酶同工酶mb(creatinekinaseisoenzymemb,ck-mb)以及he染色了解心肌的损伤程度。(2)高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,hplc)测定肾脏和心脏组织的去甲肾上腺素浓度以判断去肾交感神经是否成功及各组交感神经的兴奋状态。(3)通过western-blot检测肾脏和心脏组织的nf-e2相关因子2(nuclearfactorerythroid2-relatedfactor2,nrf2)和血红素加氧酶1(hemeoxygenase-1,ho-1)的表达水平,并通过测定组织的丙二醛(mda)和超氧化物气化酶(superoxidegasificationenzyme,sod)浓度以了解氧化应激水平。(4)通过western-blot检测肾脏和心脏组织的微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associatedprotein1lightchain3,lc3)和beclin1表达,了解自噬状态。通过免疫组织化学和western-blot检测肾脏和心脏组织的caspase3表达及tunel法以明确对组织的凋亡程度的影响。结果:根据hplc测定肾脏的去甲肾上腺素水平,以去肾交感神经后24小时开始i/r。与i/r组相比,r+i组的肌酐、尿素氮、胱抑素c、血浆ngal和ck-mb升高(p0.05)。肾脏he染色可见皮髓质交界处肾小管细胞变性、崩解和脱离,管腔扩张明显,肾间质水肿。心肌he染色可见心肌排列紊乱,间隙增宽,可见断裂。r+i组氧化应激增强,肾脏和心脏组织的mda升高,sod下降,nrf2及其下游的ho-1的表达增强(p0.05)。r+i组自噬水平下降,lc3和beclin1的表达较i/r组减少,caspase3的表达及tunel阳性细胞数增加(p0.05)。我们通过hplc测定出i/r组和r+i组肾脏及心肌组织的去甲肾上腺素水平相对于sham组明显升高,并且r+i组高于i/r组(p0.05)。结论:本研究通过建立去肾交感神经大鼠模型,从脏器功能、氧化应激状态、自噬和凋亡的水平多方面研究了去肾交感神经对肾脏缺血再灌注后肾脏和心脏的作用。我们发现去肾交感神经合并肾脏缺血后加重了肾脏缺血再灌注损伤以及远隔部位心脏的影响。考虑原因为:(1)通过化学消融达到部分去肾交感神经的效果不足以抵抗肾脏缺血再灌注所致交感神经活性的增强;(2)本研究为确定去肾交感神经起效的最佳时机,测定了去肾交感神经24小时、48小时和72小时的去甲肾上腺素水平,拟定了24小时为最佳时机,但也因此导致去肾交感神经+肾脏缺血再灌注出现二次开腹的情况,可能导致氧化应激损伤加重进一步影响心肾功能。(3)去肾交感神经后是否会有残存的肾交感神经,以及其他的代偿机制或全身交感神经反馈机制导致肾脏缺血再灌注后局部和远隔器官的损害加重尚不清楚。目前去肾交感神经对肾脏缺血再灌注的研究较少,现有的研究在模型建立、缺血时间、再灌注时间监测上均存在差异,导致结果参差不齐,还有必要对此问题进行深入研究。
【图文】：

图 1：大鼠去肾交感神经模型建立的示意图Figure 1：Diagram of renal sympathetic denervation model in rat2.3.2 大鼠肾脏缺血再灌注模型建立

图 2：大鼠肾脏缺血再灌注模型建立的示意图Figure 2：Diagram of renal ischemia-reperfusion model in rat2.3.3 去肾交感神经+肾脏缺血再灌注组模型建立
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692

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本文编号：2523487