脂肪间充质干细胞移植联合人工虫草多糖改善肾病综合征的高凝血状态及肾功能

发布时间：2020-03-10 01:13

【摘要】：背景:临床上常将人工虫草多糖作为肾病综合征的辅助药。采用阿霉素建立SD大鼠肾病综合征模型是经典的实验性肾病综合征模型之一,该模型的临床表现及病理变化均类似于人类微小病变肾病。目的:观察人工虫草多糖与脂肪间充质干细胞联合应用对肾病综合征大鼠肾功能及凝血的影响。方法:体外培养脂肪间充质干细胞制备细胞悬液,并对悬液进行PKH26标记。50只SD大鼠随机取10只为正常组(不予任何处理),余40只SD大鼠静脉注射阿霉素建立阿霉素肾病大鼠模型,随机均分为4组,模型组不作处理;脂肪间充质干细胞组尾部静脉注射脂肪间充质干细胞连续3 d;人工虫草多糖组灌胃人工虫草多糖连续12周;联合组连续3 d尾静脉注射干细胞,同时灌胃人工虫草多糖连续12周。实验12周测定各组大鼠24 h尿蛋白定量、血清血脂指标、肌酐、尿素氮及凝血指标变化;光镜下观察双肾组织病理学变化;荧光显微镜观测PKH26标记的脂肪间充质干细胞存活及分布情况,采用RT-PCR技术检测肾组织中Hpa基因表达情况。结果与结论:(1)检测指标:脂肪间充质干细胞组、人工虫草多糖组及联合组的24 h尿蛋白定量及血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、肌酐、尿素氮水平均明显低于模型组(P0.05),而血清总蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白水平则明显高于模型组(P0.05)。联合组各项指标与脂肪间充质干细胞组及人工虫草多糖组比较,差异有显著性意义(P0.05);(2)血液高凝状态:脂肪间充质干细胞组、人工虫草多糖组大鼠的血液高凝状态较模型组明显缓解,联合组进一步缓解(P0.05);(3)双肾组织病理变化:联合组的双肾组织病理改善情况明显优于脂肪间充质干细胞组和人工虫草多糖组,脂肪间充质干细胞组和人工虫草多糖组较模型组稍有改善,但不及联合组;(4)荧光显微镜观测PKH26标记的脂肪间充质干细胞:联合组多于脂肪间充质干细胞组及人工虫草多糖组;(5)Hpa基因表达:模型组较正常组明显增加,脂肪间充质干细胞组、人工虫草多糖组较模型组减少,联合组明显减少(P0.05);(6)结果提示,脂肪间充质干细胞移植联合人工虫草多糖能够改善肾病综合征大鼠的肾功能及血液高凝状态,减轻肾组织的病理学损害。
【图文】：

±s，，n=10)Table3Comparisonofcoagulationtestresultsamonggroups表注：与正常组比较，aP<0.05；与脂肪间充质干细胞组及人工虫草多糖组比较，bP<0.05。组别凝血酶原时间(s)凝血酶时间(s)活化部分凝血活酶时间(s)正常组模型组脂肪间充质干细胞组人工虫草多糖组联合组6.47±0.5820.45±1.36ab16.34±1.2414.25±1.308.50±0.87b6.62±0.4728.93±1.65ab19.67±1.4216.24±1.2310.04±0.92b6.68±0.6133.64±1.76ab25.47±1.4220.33±1.2116.27±0.81b图1体外培养传第3代的脂肪间充质干细胞形态(倒置显微镜，×200)Figure1Invitrocultureofadipose-derivedmesenchymalstemcellsatpassage3(invertedmicroscope,×200)图2各组大鼠凝血指标检测结果比较Figure2Comparisonofcoagulationtestresultsamonggroups图注：与正常组比较，aP<0.05；与脂肪间充质干细胞组及人工虫草多糖组比较，bP<0.05。403020100血指标凝s)(凝血酶原时间凝血酶时间活化部分凝血活酶时间abababbbb正常组模型组脂肪间充质干细胞组人工虫草多糖组联合组

质干细胞组、人工虫草多糖组及联合组的24h尿蛋白定量及血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、肌酐、尿素氮均明显低于模型组，联合组又明显低于脂肪间充质干细胞组及人工虫草多糖组，而血清总蛋白、白蛋白和高密度脂蛋白的比较在脂肪间充质干细胞组、人工虫草多糖组及联合组则明显高于模型组，联合组各项指标与脂肪间充质干细胞组及人工虫草多糖组比较，差异有显著性意义。可推测出脂肪间充质干细胞及人工虫草多糖具有减少蛋白尿、调节相关蛋白、调节机体免疫功能等作用。其可能通过提高整体能量与物质代谢，ABCDE图3各组大鼠的肾组织病理学变化(苏木精-伊红染色，×400)Figure3Pathologicalchangesofthekidneytissuesofratsineachgroup(hematoxylin-eosinstaining,×400)图注：图A为正常组，显示正常肾小管结构；B为模型组，显示肾小管结构破坏严重；C为脂肪间充质干细胞组，显示少量炎性细胞浸润；D为人工虫草多糖组，显示炎性细胞浸润及水肿程度均减轻；E为联合组，显示肾小管各种病理病变明显减轻。ABCDE图4PKH26标记的脂肪间充质干细胞形态(×200)Figure4MorphologicalobservationofPKH26-labeledadipose-derivedmesenchymalstemcells(×200)图注：图A为正常组：无表达；B为模型组：可见少量红色标记的脂肪间充质干细胞；C为脂肪间充质干细胞组，可见红色标记的脂肪间充质干细胞；D为人工虫草多糖组，可见红色标记的脂肪间充质干细胞；E为联合组，可见较多红色标记的脂肪间充质干细胞。图5各组大鼠Hpa基因表达Figure5ExpressionofHpageneinrats图注：图A为各组大鼠Hpa基因电泳表达；B为各组大鼠Hpa基因表达柱形图。与正常组比较，aP<0.05；与脂肪间充质干细胞组及人工虫草多糖组比较，bP<0.05。正常组模型组联合组脂肪间充?

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