饥饿诱导的自噬对膀胱癌侵袭转移的影响及其机制研究

发布时间：2020-03-30 02:57

【摘要】：目的:探讨饥饿诱导的自噬对膀胱癌侵袭转移的影响以及其可能的机制。方法:用HBSS培育膀胱癌细胞株T24和5637,以此来模拟肿瘤细胞所处的营养缺乏环境。Western blot法检测饥饿处理细胞后自噬的水平变化。Transwell迁移、侵袭实验分别检测饥饿处理对膀胱癌细胞株侵袭转移的影响。应用自噬抑制剂3-MA和CQ抑制饥饿状态下T24和5637的自噬后,Transwell法检测细胞株侵袭转移能力的变化,以此探讨自噬对膀胱癌细胞株侵袭转移的影响。Western blot法检测不同处理组的E-钙黏蛋白和波形蛋白的表达变化,进而探讨EMT是否参与饥饿诱导的自噬对膀胱癌细胞株侵袭转移的影响。应用TGF-β受体抑制剂sb431542处理细胞后,Transwell法检测细胞株侵袭转移能力的变化;Western blot法检测不同处理组TGF-β1/Smad3通路相关因子表达的变化;以及Western blot法检测应用外源重组TGF-β1细胞因子刺激细胞后的自噬状态,旨在探讨饥饿诱导自噬影响膀胱癌细胞株侵袭转移的潜在机制。结果:饥饿处理膀胱癌细胞株T24、5637后,自噬相关蛋白指标LC3B-Ⅱ的表达升高而P62的表达下降,EMT相关蛋白E-钙黏蛋白表达下降而波形蛋白表达上升;同时饥饿处理增加了细胞的侵袭转移能力;3-MA、CQ抑制自噬后,细胞的侵袭转移能力下降并伴随E-钙黏蛋白和波形蛋白表达发生逆转;在单纯饥饿处理组,TGF-β1和p-Smad3的表达升高,抑制自噬后其表达均降低;饥饿状态同时加用sb431542处理组相对于单纯饥饿处理组,细胞的侵袭转移能力下降且E-钙黏蛋白表达上升、波形蛋白表达下降。另外,应用外源重组TGF-β1细胞因子处理细胞,LC3B-Ⅱ表达升高,P62表达下降;应用TGF-β受体抑制剂sb431542后,LC3B-Ⅱ表达下降,P62表达上升。结论:饥饿诱导的自噬通过TGFβ1/Smad3信号通路诱导EMT促进膀胱癌细胞株T24、5637的侵袭转移。此外,自噬和TGF-β1可形成一个正反馈回路,协同促进细胞侵袭转移。
【图文】：

15图 1.饥饿处理诱导膀胱癌细胞自噬Figure 1. HBSS induces autophagy in T24 and 5637 cells. (Aand B) T24 and 5637 cells weretreated with HBSS for the indicated times. The indicated proteins were detected by westernblotting. GAPDH was detected as the loading control. (C and D and E) T24 and 5637 cells werecultured in HBSS with CQ (20 μmol/L) or 3MA (5 mmol/l) for 6 h. The indicated proteins weredetected by western blotting. GAPDH was detected as the loading control. *P < 0.05, **P<0.01.

重庆医科大学硕士研究生学位论文2.2 饥饿诱导自噬促进膀胱癌细胞侵袭转移Transwell 实验检测，单纯饥饿处理组穿过小室膜的细胞数量以及穿过基质胶的细胞数量相对于对照组均明显增加(图 2A 和 2B)。细胞的转移能力用穿过小室膜的细胞数量评估（图 2A），，细胞的侵袭能力用穿过基质胶的细胞数量/穿过小室膜的细胞数量评估（图 2C）。接着，我们通过抑制自噬来检测自噬对细胞侵袭转移的作用。3-MA 使 LC3B-II 表达下降，P62 表达上升(图 1D 和 1E)；CQ 使 LC3B-II累积，P62 表达上升(图 1C 和 1E)，这表明 3-MA 和 CQ 均能有效抑制自噬。Transwell 实验检测,在饥饿联合自噬抑制剂（3-MA 或 CQ）组，穿过小室膜的细胞数量以及穿过基质胶的细胞数量相对于单纯饥饿组均明显降低（图 2A 和 2B）。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.14

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本文编号：2606923