肾间质纤维化时凋亡抑制蛋白Livin的表达

发布时间：2020-03-30 07:04

【摘要】：目的:观察凋亡抑制蛋白Livin(Inhibitor of Apoptosis Proteins,IAPs,Livin)在肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)时的表达。方法:(1)不同剂量的转化生长因子TGF-β1(0、1、2、5及10ng/ml)作用于标准培养的肾小管上皮细胞(HK-2细胞)48小时,倒置相差显微镜下观察各浓度组HK-2细胞的形态学变化,Western blot实验检测各浓度组HK-2细胞Livin蛋白的表达趋势。(2)将24只CD1雄性小鼠随机平均分为对照组(ⅰ组)与单侧输尿管梗阻模型组(unilateral ureteral occlusion,UUO,ⅱ组),手术前1天ⅰ组、ⅱ组均给予等量生理盐水灌胃。术后14天摘取梗阻侧肾脏,切片分别行免疫组化实验检测E-钙粘蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-Sma)、Livin蛋白在肾脏的表达。结果:(1)TGF-β1刺激HK-2细胞后,倒置光学显微镜显示细胞形态从鹅卵石样向成纤维细胞转化,细胞变大、变梭,细胞间距明显增大;Western blot实验显示Livin蛋白在正常HK-2细胞中仅有少量表达,当TGF-β1诱导HK-2细胞发生肾间质纤维化时表达明显增加,且在TGF-β1作用剂量为2ng/ml、作用时间为48小时时表达最为显著,且各浓度组与TGF-β1作用剂量为0ng/ml,作用时间为48小时比较,Image-Pro Plus 6.0图像分析软件计算平均光密度值(累积光密度值/视野面积),P0.001,差异极显著,均具有统计学意义。(2)免疫组化SP实验结果提示:与ⅰ组相比,ⅱ组肾组织中E-Cad表达减少,而α-Sma、Livin表达增加,先用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件计算平均光密度值,取均值后采用SPSS21.0统计学软件进行统计分析,P0.05,差异有统计学意义。结论:凋亡抑制蛋白Livin与肾间质纤维化有关,但孰非因果有待更多试验探索。
【图文】：

同一视野范围内细胞数量减少。见图 1。ontrol TGF-β1-β1 诱导前后 HK-2 细胞的形态学变化(倒置光学显微镜,x200)不同剂量 TGF-β1 诱导下 Livin 的表达blot 结果显示，不同浓度（0、1、2、5、10ng/ml）的 TGF-β1 分别Livin 在 TGF-β1 剂量为 2ng/ml 时表达最多，且各浓度组与对照组具有统计学意义（P <0.001）。见图 2,图 3。

各浓度组（0、l、2、5 及 10ng/ml）TGF-β1 刺激下 HK-2 细胞中 Livin 吸光度分析，P <组化 SP 法检测各组小鼠肾组织中 E-Cad、Livin、α-SMA 的表达Cad 在各组小鼠肾脏的表达：与ⅰ组相比，ⅱ组小鼠肾组织中 E-Cad 表达明显减学意义（P <0.01）。见图 4，，表 1。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R692

【参考文献】

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本文编号：2607221