促红细胞生成素与褪黑素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

发布时间：2020-04-09 11:58

【摘要】：[目的]本研究通过建立大鼠肾脏缺血再灌注损伤(Renal ischemia-reperfusion injury,RIRI)模型,探讨重组人促红细胞生成素(Recombineant human erythropoietih,rhEPO)和褪黑素(Melatonin,Mel)对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用,并对其可能机制进行初步研究。[方法]健康雄性SD(Sprague-dawly)大鼠共32只,随机分成4组,每组8只,分别为:(1)假手术组(Sham组):麻醉后以腹正中线为切口,逐层开腹,将部分肠管移出体外,游离两侧肾脏,分离左右两侧肾蒂,并不结扎,暴露切口 45分钟后缝合切口;(2)缺血再灌注组(IR组):麻醉后以腹正中线为切口,逐层开腹,将部分肠管移出体外,游离两侧肾脏,分离左右两侧肾蒂,用无创动脉夹夹闭两侧肾蒂45分钟造成肾缺血(肾脏由鲜红色变成暗红色),45分钟后松开无创动脉夹实行再灌注,松开动脉夹5分钟内肉眼观测肾脏颜色变化,若肾灌注后颜色由暗红色转为鲜红色,表示灌注成功,然后逐层缝合切口;(3)促红细胞生成素组(EPO组):在术前24小时给予重组人促红细胞生成素(rhEPO)(3000u/kg)腹腔注射预处理,注射24小时后建立大鼠缺血再灌注模型,手术方式参照IR组;(4)褪黑素组(Mel组):在术前24小时给予褪黑素(Melatonin,Mel)(20mg/kg)腹腔注射预处理,注射24小时后建立大鼠缺血再灌注模型,手术方式参照IR组。假手术组和缺血再灌注组分别在术前24小时给予等量生理盐水(0.7ml/kg)腹腔注射。各组大鼠在肾脏恢复血液灌注24小时后处死,同时留取血清和肾组织标本。测定各组大鼠血清肌酐(serum creatinine Values,Scr)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN);将各组肾脏标本进行苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色,观察其病理学改变;免疫组化分析法测定血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1),观察其在肾脏组织中的表达情况。[结果]肾功能结果分析:与Sham组比较,IR组血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)显著升高,差异有统计学意义(P0.01)。与IR组比较,EPO组和Mel组血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。与EPO组相比较、Mel组血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)无明显变化,差异无统计学意义(P0.05)。肾脏组织形态学结果分析:Sham组大鼠肾脏组织结构基本完整,未见明显异常。与Sham组大鼠肾脏组织相比,IR组肾脏组织出现明显的形态学改变,可见肾小管上皮细胞及肾小球毛细血管内皮细胞明显肿胀、部分甚至坏死,大量管型形成,肾间质充血、水肿、大量炎症细胞浸润。与IR组大鼠肾脏组织相比,EPO组和Mel组肾脏组织可见少量炎症细胞浸润,组织损伤程度明显减轻。血红素加氧酶-1(HO-1)在肾脏表达情况结果分析:在Sham组仅见少量HO-1表达,与Sham组相比较,IR组肾脏HO-1表达明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。与IR组相比较,EPO组和Mel组肾脏HO-1表达明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。与EPO组相比较,Mel组的肾脏HO-1表达无明显差异,差异无统计学意义(P0.05)。[结论]1.大鼠肾脏缺血再灌注损伤模型制备成功,肾脏缺血再灌注损伤可导致血清肌酐及尿素氮升高,引起肾功能损伤,HO-1在肾脏的表达增加。2.rhEPO预处理能显著减轻肾功能损害程度,在病理上明显减轻肾脏损伤。3.Mel预处理能显著减轻肾功能损害程度,在病理上明显减轻肾脏损伤。4.rhEPO和Mel可以增加HO-1的表达,我们可以推测rhEPO和Mel通过诱导HO-1在肾脏的表达减轻氧化应激反应,起到对肾脏IRI的保护作用。5.rhEPO和Mel对肾脏IRI的保护程度基本相同。
【图文】：

肾小管细胞,间质,水肿,管腔

与Ｓｈａｍ比较，ＩＲ组可见肾小管细胞明显肿胀，部位出现变性，甚至坏死，逡逑管腔变狭窄，间质充血水肿，周围可见大量炎症细胞浸润，伴大量红细胞渗出（见逡逑图８－９）。ＥＰ０组和Ｍｅｌ组病理改变基本相同，，肾组织结构基本完整，可见肾小管逡逑上皮细胞轻度水肿，无变性、坏死，管腔稍狭窄，部分间质充血水肿，伴少量炎逡逑症细胞浸润（见图１０－１３）。与Ｓｈａｍ组比较，ＥＰ０组和Ｍｅｌ组肾脏病理改变轻微，逡逑且病理改变程度明显轻于ＩＲ组。逡逑１９逡逑

肾组织,肾小球,肾小管上皮细胞,肾小管

注：图６、７为Ｓｈａｍ组可见肾组织切片未见明显异常，肾小球、肾小管结构清楚，逡逑形态基本正常，肾小管上皮细胞未见肿胀，无变性、坏死，无管腔狭窄，间质无逡逑充血水肿，无炎症细胞浸润，无红细胞渗出。（ＨＥｘ２００）逡逑
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R692

【参考文献】