Renca细胞来源的exosomes活化的髓源抑制性细胞对细胞毒性T细胞的抑制效应

发布时间：2020-04-22 01:34

【摘要】：目的:探究Renca细胞来源的外泌体(exosomes)活化的髓源抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)对肾癌抗原特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic lymphocytes,CTLs)体外增殖和杀伤效应的抑制作用。方法:超速离心法从Renca细胞无血清上清液中提取出exosomes,流式细胞学检测exosomes对MDSCs的活化效应。分离并培养小鼠树突状细胞(dendritic cells,DCs)和CD8+T细胞,制备DCs活化的肾癌抗原特异性CTLs。磁珠分选exosomes活化的MDSCs,羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester,CFSE)荧光染色和流式细胞学检测MDSCs对CTLs增殖的抑制作用。将MDSCs、CTLs和Renca细胞体外共培养,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验检测exosomes活化的MDSCs对CTLs杀伤效应的抑制作用。结果:Renca细胞来源的exosomes有效地诱导了MDSCs的聚集,成功制备了DCs并获得了DCs诱导的肾癌抗原特异性CTLs。与exosomes活化的MDSCs共培养后的CTLs其增殖指数和杀伤率明显低于与未活化的MDSCs共培养后的CTLs和单独的CTLs(P0.05)。结论:Renca细胞来源的exosomes活化的MDSCs抑制了肾癌抗原特异性CTLs的体外增殖和杀伤效应,可能在肾癌免疫逃逸中扮演重要作用。
【图文】：

ratio）条件下 CTLs 的杀伤率，并以以下公式计算杀伤率（杀伤率％ 值－自然释放孔 A 值）／（最大释放孔 A 值－自然释放孔 A 值）X统计学处理 GraphPad Prism 7.0 进行数据分析，每次至少重复三个样本，数据来表述。2 组间比较采用配对 t 检验，3 组或以上比较采用 one-way以 P<0.05 表示有统计学差异。nca 细胞来源的 exosomes 的电镜形态射电镜对 exosomes 进行形态学鉴定，200nm 视野下，见 exosomes 大脂质膜包绕而成的类圆碟形，直径在 30-100nm 之间（图 1）。

重庆医科大学硕士研究生学位论文图 3 流式检测体外 PBS 处理和 Exosomes 处理 7 天后骨髓细胞 MDSCs 的比例变化Fig. 3 Flow cytometry analysis of changes in the proportion of MDSCs in bone marrow cellsafter 7 days of PBS treatment and Exosomes treatment2.4 MDSCs 的分离与鉴定体外经磁珠分选出 exosomes 活化的 MDSCs 以及 PBS 处理的 MDSCs，流式细胞仪检测 Gr-1＋和 CD11b+双阳性细胞比例（均>95%），，倒置显微镜观察 MDSCs形态，发现 20 m 视野下 PBS 处理的和 exosomes 活化的 MDSCs 分布均匀，大多呈圆球形，为单个核细胞，细胞核较大。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.11

【参考文献】

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1 刘晓玲;郭红月;董猛;宋振川;;小鼠骨髓树突状细胞体外培养扩增与生物学特性研究[J];肿瘤预防与治疗;2014年01期

本文编号：2635978