MiRNA-9-5p作用于CXCR4抑制前列腺癌细胞的增殖、转移和侵袭的机制研究

发布时间：2020-04-22 08:45

【摘要】：背景和目的:小分子RNA作为非编码RNA的重要组成部分参与多种病理及生理进程,包括肿瘤的发生发展;此前有研究证明了Mi RNA-9-5p在人类肿瘤发生中的重要调节作用,主要表现为抑制肿瘤的恶性生物学行为。但是其调节肿瘤的具体机制远没有完全阐明。这项研究的目的就Mi RNA-9-5p如何影响前列腺癌细胞的增殖、转移和侵袭的机制进行具体研究。方法:应用实时定量PCR分别检测前列腺癌细胞系PC3,DU145以及前列腺癌对照细胞正常前列腺上皮细胞RWPE-1中mi RNA-9-5p与CXCR4的表达水平,并同时检测其在前列腺癌组织中的表达水平。应用慢病毒感染技术建立稳定表达mi RNA-9-5p的前列腺癌细胞系PC3/mi RNA-9-5p,并进行实时定量PCR验证。利用CCK-8法分析PC3/mi R-9-5p细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析PC3/mi R-9-5p细胞迁移和侵袭能力的变化。利用生物信息学方法预测mi R-9-5p的靶基因,并构建靶基因3’-UTR的野生型(WT)和突变型(Mut)荧光素酶报告基因质粒,并通过荧光素酶报告基因法和荧光定量PCR验证。结果:前列腺癌对照细胞正常前列腺上皮细胞RWPE-1中mi R-9-5p的表达水平显著高于前列腺癌细胞PC3和DU145。在稳定过表达mi R-9-5p的PC3/mi R-9-5p细胞中mi R-9-5p的表达水平显著高于PC3细胞(P0.01)和对照组细胞(PC3/mi R-NC)(P0.01)。细胞增殖能力检测显示与PC3组(P0.05)和PC3/mi R-NC组(P0.01)相比PC3/mi R-9-5p组在72 h和96 h时细胞活力显著降低。Transwell迁移和侵袭试验结果显示PC3/mi R-9-5p组与PC3组和PC3/mi R-NC组相比细胞迁移和侵袭能力显著下降(P0.01)。生物信息学预测显示mi R-9-5p能够靶向结合CXCR4的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析显示:mi R-9-5p能够靶向作用于CXCR4的3’-UTR抑制萤光素酶表达,CXCR4可以部分回复mi R-9-5p的肿瘤抑制作用。荧光定量PCR检测的结果显示在过表达\miR-9-5p能够显著抑制PC3细胞中CXCR4的表达。结论miR-9-5p能够抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,这可能是通过靶向抑制CXCR4的表达来实现的。
【图文】：

前列腺癌,腺癌,表达水平,三次

定量 PCR 检测 miR-9-5p 在 RWPE-1、PC3 和 DU145 细胞中的表达 .05，**P<0.01应用实时荧光定量 PCR 在 7 对前列腺癌组织和肿瘤旁的正常9-5p 的基础表达水平，重复三次结果显示 miR-9-5p 在前列腺癌降低，在有限的检测例数里面有一半以上（编号 1,2,3,6）的表以上，其中一例（编号 1）达到了百分之九十。如图 2 所示.

腺癌,表达水平,前列腺癌,正常组织

荧光定量 PCR 检测 miR-9-5p 在 RWPE-1、PC3 和 DU145 细胞中的表达与 P*P<0.05，**P<0.01同时应用实时荧光定量 PCR 在 7 对前列腺癌组织和肿瘤旁的正常组织iR-9-5p 的基础表达水平，重复三次结果显示 miR-9-5p 在前列腺癌组织显著降低，，在有限的检测例数里面有一半以上（编号 1,2,3,6）的表达减一半以上，其中一例（编号 1）达到了百分之九十。如图 2 所示.
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.25

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