DIVERSIN通过JNK通路促进膀胱癌T24细胞的增殖和侵袭
发布时间：2020-05-07 21:55
【摘要】：目的:膀胱癌是当今世界发病率最高而且发病机制最复杂的泌尿系统恶性肿瘤之一。本课题组长期致力于锚蛋白重复序列6Diversin在肿瘤的发生发展侵袭转移机制的相关研究,前期结果显示Diversin在非小细胞肺癌,三阴乳腺癌,神经胶质瘤,尤其是膀胱癌组织中表达水平均显著高于癌旁组织。而且在非小细胞肺癌中Diversin通过激活Wnt/JNK通路对非小细胞肺癌的侵袭转移发挥上调作用。因此,本课题诣在证实Diversin对膀胱癌组织发生发展侵袭转移发挥的功能,此外在细胞水平上,对其促进肿瘤侵袭转移,发生发展的表型及其分子机制进行初步研究。研究方法:本研究收集沈阳医学院附属中心医院2009年1月~2015年12月收治的膀胱尿路上皮癌患者的术后标本作为研究对象。通过免疫组化的方法对其癌组织和癌旁组织中的Diversin的表达水平进行检测。为了进一步证实Diversin在肿瘤的发生发展侵袭转移等过程中的作用,本实验以膀胱尿路上皮癌T24细胞作为实验对象,利用瞬时转染siRNA的方法对T24细胞中的Diversin的表达水平进行下调,并通过蛋白印记发对下调的效果进行检测。本课题采用MTS的方法对干扰组和对照组细胞的增殖能力进行检测,并且根据MTS的结果绘制实验组和对照组的生长曲线;利用Transwell侵袭实验对实验组和对照T24细胞的侵袭转移能力进行初步检测。为了研究Diversin促进肿瘤发生发展侵袭转移的分子机制,同时基于本课题组的前期实验结果,本实验利用Western-blot方法对T24实验组和对照组细胞中Wnt通路的Wnt/β-catenin经典途径和Wnt/JNK途径中的关键蛋白β-catenin,JNK,p-JNK的表达水平进行检测,继而表征Wnt信号通路经典途径和JNK途径的活性。结果:1、Diversin在膀胱癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,且Diversin的表达主要定位于肿瘤细胞的胞浆与包膜处(p0.05)。2、下调Diversin的膀胱癌细胞T24细胞系的增殖能力显著低于阴性对照组。3、下调Diversin的T24细胞系的侵袭能力显著低于阴性对照组。4、下调Diversin的T24细胞中,磷酸化JNK与本底JNK表达量的比值显著低于阴性对照组。结论:1、Diversin与膀胱癌的发生,恶性转化,TNM分期,有无淋巴结转移的病理因素呈正相关。2、Diversin可提高T24细胞系的增殖能力和侵袭转移能力。3、Diversin可能通过激活T24细胞中Wnt信号通路的JNK途径发挥其生物学功能。
【图文】：
3 实验结果3.1 Dviersin 在膀胱癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织为了证明 Diversin 在膀胱肿瘤中对细胞增殖，侵袭转移等病例因素中发挥促进作用，本课题采用免疫组织化学方法检测了收集的 40 例膀胱尿路上皮癌组织标本中 Diversin 中的表达水平进行检测。在收集的膀胱尿路上皮癌的病历资料当中，Diversin 呈阳性表达的病例有 38 例（阳性表达率为 95％）。同时免疫组织化学染色结果显示，Diversin 只要在膀胱癌组织中细胞的胞浆和包膜中表达水平较高（图 1B、C、D）。而在正常尿路上皮中 Diversin 呈现阴性表达（图 1A）。以上结果进一步证实 Diversin 的表达水平与膀胱癌的恶性转化，TNM 分期，有无淋巴结转移的病理因素相关。
时转染 Diversin 特异性小干扰 RNA 的手段对 T24 细胞中 Diversin 的表达水平进行下调，以无意义序列作为阴性对照。转染 48h 后以 western-blot 的方法检测Diversin 表达水平下调的效果，结果显示转膀胱癌 T24 细胞转染特异性 siRNA 48h 后，Diversin 的水平表达与对照组相比显著下降（图 2A）。为了证实 Diversin 在膀胱癌 T24 细胞中对细胞增殖作发挥促进作用。 我们对转染后的 T24 细胞进行 MTS 增殖能力检测，，并对干扰组和对照组细胞绘制生长曲线。MTS 结果显示，Diversin 干扰组 T24 细胞的增殖能力与阴性对照组细胞相比显著降低（图 2B），这一结果提示下调 Diversin 的表达水平可降低 T24细胞的增殖能力为了探讨 Diversin 对膀胱癌细胞侵袭转移能力的调控作用，本实验采用Transwell 的方法对 T24 细胞的干扰组和阴性对照组进行检测。Transwell 结果显示，阴性对照组 Transwell 小室下室染色的细胞数量显著高于干扰组（图 2 C,D），这一结果提示下调 Diversin 的表达水平可降低 T24 细胞的侵袭能力。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.14
本文编号：2653605
【图文】：
3 实验结果3.1 Dviersin 在膀胱癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织为了证明 Diversin 在膀胱肿瘤中对细胞增殖，侵袭转移等病例因素中发挥促进作用，本课题采用免疫组织化学方法检测了收集的 40 例膀胱尿路上皮癌组织标本中 Diversin 中的表达水平进行检测。在收集的膀胱尿路上皮癌的病历资料当中，Diversin 呈阳性表达的病例有 38 例（阳性表达率为 95％）。同时免疫组织化学染色结果显示，Diversin 只要在膀胱癌组织中细胞的胞浆和包膜中表达水平较高（图 1B、C、D）。而在正常尿路上皮中 Diversin 呈现阴性表达（图 1A）。以上结果进一步证实 Diversin 的表达水平与膀胱癌的恶性转化，TNM 分期，有无淋巴结转移的病理因素相关。
时转染 Diversin 特异性小干扰 RNA 的手段对 T24 细胞中 Diversin 的表达水平进行下调，以无意义序列作为阴性对照。转染 48h 后以 western-blot 的方法检测Diversin 表达水平下调的效果，结果显示转膀胱癌 T24 细胞转染特异性 siRNA 48h 后，Diversin 的水平表达与对照组相比显著下降（图 2A）。为了证实 Diversin 在膀胱癌 T24 细胞中对细胞增殖作发挥促进作用。 我们对转染后的 T24 细胞进行 MTS 增殖能力检测，，并对干扰组和对照组细胞绘制生长曲线。MTS 结果显示，Diversin 干扰组 T24 细胞的增殖能力与阴性对照组细胞相比显著降低（图 2B），这一结果提示下调 Diversin 的表达水平可降低 T24细胞的增殖能力为了探讨 Diversin 对膀胱癌细胞侵袭转移能力的调控作用，本实验采用Transwell 的方法对 T24 细胞的干扰组和阴性对照组进行检测。Transwell 结果显示，阴性对照组 Transwell 小室下室染色的细胞数量显著高于干扰组（图 2 C,D），这一结果提示下调 Diversin 的表达水平可降低 T24 细胞的侵袭能力。
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.14
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 潘起晨;王明昊;班允超;崔晓;王运杰;;Diversin在人脑星形细胞瘤组织中的表达及其对肿瘤细胞增殖和侵袭的影响[J];山东医药;2015年20期
本文编号：2653605
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/mjlw/2653605.html
最近更新
教材专著
