JNK及亲环素D在肾缺血再灌注诱导线粒体途径necroptosis中的研究

发布时间：2020-05-31 10:38

【摘要】：目的:建立并采用肾脏缺血-再灌注necroptosis大鼠模型(Ischemia-Reperfusion Injury,IRI),观察其生化指标、肾脏病理学改变及LC3-II、JNK、CYPD蛋白的表达,以探讨JNK及亲环素D对肾缺血再灌注中necroptosis的影响及其相关性。方法:1.建立肾脏缺血-再灌注necroptosis大鼠模型:选取9只体重为220-250mg的健康成年雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠,按数字随机法将其随机分为3组:1组阴性对照组,2组模型组,3组nec-1组,每组3只大鼠。通过将双侧肾动脉夹闭45分钟然后再灌注24小时,在2组和3组中建立肾缺血再灌注necroptosis大鼠模型,于模型完成前1h在3组中予腹腔注射nec-1(由DMSO溶解),在2组中再灌注前1小时给予腹腔注射相应体积的DMSO溶液,1组仅把双侧肾蒂游离,余未做任何治疗与处理,于再灌注24小时后取肾脏组织用Western blot方法检测各组LC3-II的表达,验证大鼠肾脏necroptosis造模成功。2.模型成功后,选取24只体重为220-250mg的健康成年雄性SD大鼠,按数字随机法将其随机分为4组:A组假手术组,B组模型组,C组JNK抑制组,D组亲环素D抑制组,每组6只大鼠。在C组和D组建立肾缺血再灌注necroptosis大鼠模型,于模型完成前1小时予腹腔注射给药(干预药物由DMSO溶解)。在B组进行缺血再灌注necroptosis模型建立后,在再灌注前1小时给予腹腔注射等体积的DMSO溶液。A组仅把双侧肾蒂游离,余未做任何治疗与处理。建模成功后,四组大鼠收集标本:尾静脉采血检测血肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN);取肾脏组织行HE染色制作病理切片,观察肾脏组织在显微镜下的病理改变及评估肾小管损伤指数。用Western blot方法检测LC3-II、JNK、亲环素D(CYPD)的表达。结果:1.与1组正常对照组相比,3组nec-1组的LC3-II蛋白的表达明显升高(P0.05),比2组模型组明显降低(P0.05)。2.与假手术组相比,JNK抑制组、亲环素D抑制组及模型组的Scr、BUN水平均升高(P0.05),以模型组升高更为显著(P0.01)。且JNK抑制组及亲环素D抑制组比模型组的Scr、BUN均降低(P0.05)。3.HE染色显示:假手术组:肾小管上皮细胞是完整的,基底膜是连续且完整的。模型组:肾小管结构异常,表现为不同程度的细胞脱落坏死、肿胀、浑浊、管型形成、炎症细胞浸润。JNK抑制组及亲环素D抑制组:细胞脱落坏死、肿胀、浑浊、管型形成较模型组均减轻,炎症细胞浸润相对减少。与假手术组相比,JNK抑制组及亲环素D抑制组肾小管坏死评分显著增加(P0.05),但低于模型组(P0.05)。4.Western blot结果示:1)假手术组中LC3-II、CYPD、JNK蛋白的表达量很低,模型组中三者的表达均高于假手术组(P0.05)。JNK抑制组及亲环素D抑制组LC3-II、亲环素D、JNK的表达较假手术组均升高(P0.05),但均低于模型组(P0.05)。2)当阻断JNK时,JNK及亲环素D的表达量均下降,C组中的亲环素D表达量和D组中的亲环素D表达量无明显差异,两者间的差异不具有统计学差异(P0.05);当阻断亲环素D时,亲环素D的表达量明显下降,而JNK的表达量无明显下降,D组中JNK的表达量明显高于C组中JNK的表达量,其差异具有统计学差异(P0.05)。结论:1)JNK抑制剂及亲环素D抑制剂均能减轻肾脏缺血再灌注损伤,对肾脏缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,JNK及亲环素D在肾缺血再灌注诱导线粒体途径necroptosis中起重要作用。2)JNK抑制剂改善大鼠的肾脏缺血再灌注损伤可能与下调亲环素D的表达有关。
【图文】：

第 3 章 实验结果注模型中 LC3-II 蛋白的：1 组 LC3-II 蛋白的表达量很。3 组的 LC3-II 蛋白的表达较的表达量水平比较（n=3， X±S）N LC) 3 0.3393 0.5843 0.446150.2 组，P<0.051 组 2 组 3 组LC

C 组（HE×200） D 组（HE×200）图 3.4 各组大鼠的 HE 染色切片的病理学表现注：A 组表示假手术组，B 组表示模型组，C 组表示 JNK 抑制组，D 组表示亲环素 D 抑制组。3.4.2 肾小管坏死评分结果根据各组大鼠肾脏 HE 染色切片在 200×光镜下进行观察评价，并进行肾小管坏死评分。如表 3.3 所示，与假手术组相比，模型组、JNK 抑制组及亲环素 D抑制组的肾小管坏死评分均升高（P<0.05），以模型组为甚（P<0.01）。与模型组相比，，JNK 抑制组及亲环素 D 抑制组的肾小管坏死评分均下降（P<0.05），其差异具有统计学意义。JNK 抑制组和亲环素 D 抑制组的肾小管坏死评分无明显差异（P>0.05）。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R692

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本文编号：2689726