人前列腺癌PC-3细胞阿比特龙耐药细胞株的构建及耐药性检测

发布时间：2020-06-02 01:25

【摘要】：[研究背景及目的]:前列腺癌是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤,其发病率在欧美国家已经位居男性恶性肿瘤的首位。[1]在我国,前列腺癌的发病率虽然不及欧美国家,但是近年来其发病率和检出率也在不断地上升。[2]内分泌治疗是前列腺癌的重要治疗方法之一,传统的内分泌药物通过一段时间的用药以后,都会逐渐产生耐药,激素依赖性前列腺癌逐渐转变为去势抵抗性前列腺癌。而醋酸阿比特龙作为新开发是内分泌药物,已作为去势抵抗性前列腺癌患者治疗的一线用药,其主要原理是通过抑制雄激素合成途径中的关键酶CYP17从而抑制雄激素的合成。然而即使最初对阿比特龙敏感的患者,在经过一段时间的治疗后也会逐渐产生对阿比特龙的耐药。至于导致阿比特龙耐药的机制,目前还没有完全研究清楚。如果以患者为对象进行阿比特龙耐药的研究似乎不太现实。目前尚未有前列腺癌PC-3阿比特龙耐药细胞株的构建,因此,为了能对阿比特龙耐药机制进行进一步研究,本课题拟:(1)建立人前列腺癌PC-3细胞阿比特龙耐药细胞株,为以后的研究奠定基础;(2)检测耐药细胞的耐药性,初步探索耐药原因。[实验方法]:(1)使用药物浓度逐步递增的方法获得PC-3阿比特龙耐药细胞株;(2)使用CCK-8法检测PC-3亲本株及PC-3耐药株的IC50,计算得到耐药指数RI;(3)使用CCK-8法进行增殖实验比较PC-3亲本株和PC-3耐药株的增殖能力;(4)流式细胞仪检测PC-3亲本株和PC-3耐药株的细胞周期及凋亡;(5)实时荧光定量PCR检测相关耐药基因的表达差异。[实验结果]:(1)经过7个月的药物诱导,获了耐药指数为1.61的前列腺癌PC-3细胞阿比特龙耐药细胞株;(2)PC-3耐药株倍增时间较PC-3亲本株短;(3)PC-3耐药株处于S期的细胞较PC-3亲本株增多,处于G1期、G2/M期的细胞数目减少,PC-3耐药株较PC-3亲本株凋亡细胞较多;(4)PC-3耐药株AR、AR-V7、ErbB2、hnRNPF、CYP17A1表达均上调。[结论]:人前列腺癌PC-3细胞阿比特龙耐药细胞株建立成功,PC-3耐药株较PC-3亲本株生长速度增快,生长较为活跃,相关耐药基因表达上调。
【图文】：

１－５Ｃ邋对比图邋１－５Ｃ邋Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ邋ｃｈａｒｔ逡逑１．３．６实时荧光定量ＰＣＲ结果逡逑（１）如下图１－６Ａ所示，与ＰＣ－３亲本株相比，ＰＣ－３耐药株ＡＲ表达上调（Ｐ逡逑＜０．０５）邋0逡逑１８逡逑

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【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.25

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本文编号：2692383