Hsa-miR-429通过抑制CDKN2B促进膀胱癌细胞增殖的研究

发布时间：2020-06-10 14:19

【摘要】：【目的】膀胱癌是九大常见的恶性肿瘤之一,根据流行病学统计全世界每年有约386000新病例被诊断。近年来越来越多的证据表明microRNA在肿瘤的发生和发展过程中起到关键调控作用。Hsa-miR-429是一种新发现的microRNA,作为一种潜在的生物标志物并参与多种癌症的发展。然而,Hsa-miR-429在膀胱癌中的临床意义和分子机制尚不清楚。本研究旨在探讨Hsa-miR-429在膀胱癌发生发展中的作用。【方法】采用实时荧光定量PCR技术在50例膀胱癌临床样本中检测了hsa-miR-429和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2B(CDKN2B)的表达水平。膀胱癌T24和5637细胞中敲低CDKN2B的表达水平通过转染CDKN2B的siRNA或上调hsa-miR-429的表达水平通过转染hsa-miR-429 mimic。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测转染后CDKN2B表达水平。采用双荧光素酶报告实验检测hsa-miR-429和CDKN2B的3’-UTR区域位点之间的相互结合。采用MTT和EdU实验测定细胞增殖。采用ELISA法测定细胞凋亡。【结果】我们发现hsa-miR-429表达水平与肿瘤的分级分期密切相关,较高的hsa-miR-429表达水平对应较高的肿瘤分级和分期,且所有hsa-miR-429低表达的患者均存活超过5年,而hsa-miR-429高表达的患者五年生存率只有58%。Hsa-miR-429和CDKN2B在膀胱癌中的表达水平呈负相关。Hsa-miR-429 mimic在膀胱癌细胞T24和5637中能够降低CDKN2B的mRNA和蛋白质的表达水平。双荧光素酶报告发现hsa-miR-429能够与CDKN2B的3’-UTR区域结合。上调hsa-miR-429或下调CDKN2B均能够促进细胞增殖,抑制细胞凋亡。【结论】我们的结果表明hsa-miR-429在膀胱癌中能够通过抑制CDKN2B发挥致癌作用,这可能有助于进一步了解膀胱癌发生发展的分子机制。
【图文】：

膀胱癌,患者预后

hsa-miR-429 高表达的膀胱癌患者预后差（五年生存率为 58%），-miR-429 和 CDKN2B在膀胱癌中的表达水平-429 在膀胱癌组织中的表达升高，而 CDKN2B 在膀胱癌组织中的表iR-429 及 CDKN2B 在膀胱癌组织表达水平呈负相关，具体结果如荧光 PCR 检测 50 胱癌组织与配对癌旁正常组织中 hsa-miR-429

碱基序列,过表达,效率,表达水平

.3 CDKN2B siRNA 和 microRNA mimic 或过表达载体作用效率检测。A. 分别DKN2B 干扰 RNA 及对照组碱基序列后，qPCR 检测 CDKN2B 在膀胱癌 5637、T系中的表达水平，P<0.001，P=0.001；Western blot 检测 CDKN2B 在膀胱7、T24 细胞系中的表达水平。B.分别转染 hsa-miR-429 模拟物及对照组碱基，qPCR 检测 hsa-miR-429 在膀胱癌 5637、T24 细胞系中的表达水平，P=0.0.002；Western blot 检测 CDKN2B 在膀胱癌 5637、T24 细胞系中的表达水平实验均独立重复 3 次以上。 hsa-miR-429和CDKN2B 3’UTR相互结合究使用双荧光素酶结合靶点实验检测hsa-miR-429和CDKN2B 3’UTR的相互结结果如下所示：-miR-429 mimic 及 CDKN2B-WT，CDKN2B-MUT 表达质粒分别共转染 T24 和 5637，，行双荧光素酶活性检测，如图所示，转染了 CDKN2B-WT 质粒的 T24 和 563
【学位授予单位】：广州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R737.14

【参考文献】