AOE通过调节miRNA的表达下调PTEN的抗糖尿病肾病作用

发布时间：2020-06-10 19:22

【摘要】：第一部分AOE调节micro RNA在糖尿病小鼠肝脏中的表达谱目的miRNA参与肥胖和2型糖尿病的病理生理过程。有研究表明,益智仁有抗氧化活性和抗糖尿病活性。本研究旨在建立经AOE处理后的db-/db-小鼠糖尿病肾病的miRNA差异表达谱。方法db-/db-小鼠是将24只小鼠分为三组,其中8只DB/DB小鼠和16只db-/db-小鼠,DB/DB小鼠组和db-/db-H_20小鼠组给予安慰剂(生理盐水)db-/db-AOE组每天一次通过胃内途径给药500mg/kg AOE,持续8周。将安乐死的小鼠解剖并从肝中提取miRNA,使用标准方法进行测序,用聚类分方法来预测目标基因,并通过q RT-PCR确认,再用KEGG对靶miRNA进行分类。结果测序表明,在与db-/db-H_20组小鼠相比,在DB/DB组小鼠的肝脏中,有19个miRNA表达有差异,其中8个下调,11个上调;在db-/db-AOE组小鼠肝脏中有7个miRNA表达有差异调节,其中5个下调,2个上调,分别在两组中鉴定出mmu-mi R-423-5p和mmu-mi R-598-3p。在db-/db-AOE组小鼠肝脏组织中mmu-mi R-598-3p和mmu-mi R-423-5p的表达量的均高于未经AOE处理的DB/DB组与db-/db-H_20组。结论相比较于db-/db-H_20组小鼠,我们确定了DB/DB组中存在19种miRNA有表达差异,在db-/db-AOE组中有7种miRNA存在表达差异。本研究中发现的大多数miRNA先前都与肥胖或糖尿病有关,并确认了2种miRNA(mi R-598和mi R-423)的表达在db-/db-H_20小鼠中受到抑制,但通过AOE处理其表达可能恢复。这两种miRNA可能参与重要的信号传导途径,其中包括MAPK和Ras信号通路。第二部分AOE下调PTEN表达的抗糖尿病作用机制目的糖尿病以高血糖水平为特征。活性氧(ROS)水平升高可能破坏胰岛素信号并导致胰岛素抵抗。益智仁提取物(AOE)具有强大的抗氧化活性,因此可以抑制胰岛素抵抗。本研究的目的是探讨AOE对2型糖尿病动物模型db-/db-小鼠的血糖、胰岛素和脂质水平的影响,通过测量小鼠体重和血糖浓度的变化来测100,300和500mg/kg的AOEs对db-/db-小鼠的作用,测定500mg/kg AOE对葡萄糖耐量,血浆胰岛素浓度,血浆脂质谱,肝脏脂质谱和尿蛋白影响。方法AOE以不同剂量(100,300和500mg/kg)给予这些小鼠8周,用2,2-二苯基-1-苦基肼基(DPPH)测定AOE的自由基清除活性,测定经不同浓度AOE处理的小鼠体重和血浆葡萄糖浓度变化。用AOE 500mg/kg处理小鼠8周,测定其OGTT、血浆胰岛素水平、血浆血脂水平及肾功能。8周后处死小鼠,解剖取出肾脏、肝脏组织,用Western Blotting检测肾脏组织、肝脏组织中PTEN的蛋白表达水平。结果10g/L的AOE表现出最佳的抗氧化能力来清除DPPH自由基。DB/DB和db-/db-小鼠以及经不同浓度AOE处理8周,体重的变化在任何组间均无显着差异。与db-/db-H_20组相比,经不同浓度AOE处理组的血浆葡萄糖水平显着降低,最高剂量的AOE 500mg/kg对于降低血糖水平是最有效的。葡萄糖刺激显着增加了db-/db-H_20组小鼠的血糖浓度,而AOE500小鼠在葡萄糖负荷后30,60和90分钟显示出显着抑制的血糖浓度。AOE对血浆胰岛素浓度的影响为db-/dbH_20组的血浆胰岛素浓度显着高于DB/DB组和db-/db-AOE组。db-/db-组甘油三酯和胆固醇的血浆浓度分别比db-/db-小鼠中的水平低15.0%和10%(P0.05)。与DB/DB小鼠相比,db-/db-H_20组小鼠的尿白蛋白(P0.05),肌酐(P0.05)和BUN(P0.05)均显着增加。在db-/db-AOE组,小鼠24小时尿白蛋白排泄量为0.62±0.17mg,显着低于db-/db-H_20组(1.27±0.31mg,P0.05),但仍高于DB/DB组(0.32±0.04 mg,P0.05)。AOE处理后肌酐和BUN的浓度也显着降低(P0.05)。在db-/db-H_20组小鼠的肝脏和肾脏组织中PTEN蛋白表达均增强,但在db-/db-小鼠中AOE500处理后,PTEN蛋白表达显着降低(P0.05)。结论AOE通过降低血糖浓度和氧化应激,增加血浆胰岛素水平,改善肾功能,并减少T2DM小鼠PTEN表达,最终改善高血糖和高脂血症。因此,AOE可能作为一种新型药物或功能性膳食补充剂用于预防糖尿病。
【图文】：

图 2.2 用聚类分析的方法分析 DB/DB 组和 db-/db- H20 组小鼠的肝脏组织中 miRNA 的表达的分层聚类分析。由于在未经 AOE 处理的 DB/DB 小鼠，db-/db- H20 小鼠和经 AOE 处理的 db-/dbAOE500 小鼠这三个组中存在 24 个 miRNA 表达有差异，所以肝组织被聚类了。这些分析的样品以队列的行程排列。左侧是 miRNA 聚类树，顶部是样本聚类树。顶部的色标表示 miRNA 的相对表达水平，红色表示表达水平相对较高，蓝色表示表达水平相对较低。

图 2.2 用聚类分析的方法分析 DB/DB 组和 db-/db- H20 组小鼠的肝脏组织中 miRNA 的表达的分层聚类分析。由于在未经 AOE 处理的 DB/DB 小鼠，db-/db- H20 小鼠和经 AOE 处理的 db-/dbAOE500 小鼠这三个组中存在 24 个 miRNA 表达有差异，所以肝组织被聚类了。这些分析的样品以队列的行程排列。左侧是 miRNA 聚类树，顶部是样本聚类树。顶部的色标表示 miRNA 的相对表达水平，红色表示表达水平相对较高，，蓝色表示表达水平相对较低。
【学位授予单位】：海南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R587.2;R692.9

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本文编号：2706742